Научная статья

Кэролин Торкелсон (Carolyn J. Torkelson)1, Эрин Свит (Erin Sweet)2, Марк Мартзен (Mark R. Martzen)2, Маса Сасагава (Masa Sasagawa)2, Синтия Веннер (Cynthia A. Wenner)2, Джульет Гэй (Juliette Gay)1, Эми Патури (Amy Putiri)2 и Лианна Стендиш (Leanna J. Standish)2.

1 Кафедра семейной медицины и здравоохранения, медицинский факультет Университета Миннесоты
420 Delaware Street SE, MMC 381, Mayo Building B529, Minneapolis, MN 55455, USA
2 НИИ университета Бастир
14500 Juanita Drive N.E., Kenmore, WA 98028, USA

Письма можно направлять Каролин Торкелсон tork0004@umn.edu  

Получено 10 января 2012; Принято 16 февраля 2012

Научные редакторы: C. Никко (C. Nicco) и Дж. Ниландстед (J. Nylandsted)

Copyright © 2012 Каролин Торкелсон и соавт. Это общедоступная статья, распространяемая под лицензией Creative Commons «С указанием авторства», которая разрешает неограниченное использование, распространение и копирование на любом носителе, при условии ссылки на оригинал.

Вступление. Предполагалось, что принимаемые перорально препараты из грибов Trametes versicolor (ТР) улучшают иммунную реакцию у женщин с раком молочной железы после стандартной химиотерапии и лучевой терапии.

Методы.

Первая стадия двух-центрового исследования с эскалацией дозы была проведена для определения максимальной переносимой дозы препарата из ТР, принимаемого ежедневно небольшими дозами в течение 6 недель после недавнего завершения курса лучевой терапии. Было отобрано одиннадцать испытуемых и девять женщин прошли исследование до конца. Каждая группа состояла из трех участников, принимающих одну из трех доз ТР (3, 6 или 9 граммов). Иммунные данные были собраны до и после лучевой терапии, в 3 момента времени в процессе лечения и после 3-недельного периода выведения препарата из организма. Результаты. Было отмечено девять побочных эффектов (7 легких, 1 умеренный и 1 тяжелый) из чего следует вывод, что ТР переносится хорошо. Иммунологические результаты свидетельствуют о тенденции (1) увеличения лимфоцитов при 6 и 9 гр/сут; (2) увеличения функциональной активности естественных клеток-киллеров  при 6 г/сут; (3) дозозависимого увеличения CD8+ Т-клеток и CD19+ B-клеток, но не CD4+ Т-клеток или CD16+ 56+ NK-клеток. Вывод. Результаты показывают, что препарат из ТР в дозах до 9 грамм в сутки является безопасным и переносимым женщинами с раком молочной железы при послепервичном лечении. Этот препарат ТР может улучшить иммунный статус у больных раком молочной железы с ослабленным иммунитетом при пероральном приеме после первичного стандартного онкологического лечения.

1. Вступление

Trametes versicolor (ТР), также известный как Coriolus versicolor (Колориус многоцветный), часто называемый Индюшиный хвост - это виды грибов, из которых были изготовлены препараты, имеющие долгую историю применения в традиционной азиатской медицине [1, 2]. Две фракции протеогликана, полисахарид-K (PSK) и полисахарид-пептид (PSP) подобны экстрактам ТР, полученных вытяжкой горячей водой, обладающих противоопухолевой активностью [3, 4]. В Японии, PSK назначают пациентам с онкологическими заболеваниями повседневно во время и после лучевой и химиотерапии [5-8]. Также является распространенной практикой среди многих врачей-натуропатов и интегративных онкологов в США прописывать больным раком молочной железы целый, высушенный ТР [9]. Иммунологическая активность ТР гипотетически является основным базовым механизмом, ответственным за его противоопухолевые действия, а также его влияние на выживаемость [3, 4]. Механизм действия Trametes versicolor включает усовершенствование как врожденного, так и адаптивного иммунного ответа, по крайней мере, частично через активность Toll-подобного 2 рецептора [10]. Доклинические исследования на животных и предварительные клинические данные подтверждают гипотезу о том, что компоненты ТР могут быть полезны в лечении эстроген-рецептороотрицательного и эстроген-рецептороположительного рака путем снижения иммунологических подавляющих эффектов лечения и продления безрецидивной выживаемости путем повышения иммунологического надзора и ослабления толерантности опухолевых антигенов [5, 6].

Понимание того, как на иммунологические факторы влияют методы лечения рака молочной железы, предполагает перспективные направления в развивающихся адъювантных терапиях для укрепления противоопухолевого иммунного ответа. Последние данные показывают, что определенные классы химиотерапевтических препаратов вызывают некроз клеток иммуногенной опухоли, что приводит к повышению кросс-презентации антигена и стимуляции противоопухолевого иммунного ответа. Доказательства свидетельствуют о том, что NK-клетки играют важную роль в профилактике как раннего, так и метастатического рака молочной железы [11]. У некоторых пациентов с раком молочной железы наблюдалось отсутствие активности NK-клеток против мишеневидных клеток K562 [12]. Текущие данные показывают, что пациенты с раком молочной железы, прошедшие операцию, химиотерапию и радиотерапию обладали иммунным дефицитом [13, 14]. Андерсен и соавт. сообщили, что уровни стресса у больных раком молочной железы существенно предрекали более низкий NK-клеточный лизис, а также сниженный пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови [15]. Наше предыдущее исследование подтвердило, что лимфопения и низкая активность NK-клеток присутствовали на протяжении 6 недель после завершения лучевой терапии [16].

Чтобы лучше понять потенциальную пользу Trametes versicolor для женщин с раком молочной железы, требовалось исследование с эскалацией дозы для оценки безопасности и переносимости. В этом направлении мультидисциплинарная команда из университета Миннесоты и университета Бастир провела первую стадию исследования с эскалацией дозы для определения безопасности и максимально переносимой дозы ТР у женщин с диагнозом рака молочной железы, которые прошли стандартное лечение и были готовы участвовать в девятинедельном исследовании после лучевой терапии.

2. Методы

2.1. Исследование с эскалацией дозы. Стандартный план первой стадии с 3 испытуемыми по уровню дозы до достижения максимальной переносимой дозы. Режим эскалации дозы для каждой группы ТР: 3 гр (наиболее часто используемая доза); 6 гр; 9 гр; 12 гр; 18 гр; 24 гр. В исследовании участвовали только группа, принимающая по девять грамм (N = 9).

2.2. Участники исследования. После предоставления письменного согласия, в исследование были включены женщины в возрасте от 21 года до 75 лет с диагнозом рака молочной железы стадий I, II или III, перенесшие операции и химиотерапию и готовые начать лучевую терапию. Установленные требования отбора также включали желание соблюдать постоянную диету в течение всего периода исследования и избегать пищевых источников грибов и других продуктов из трав с иммуномодулирующими эффектами при лучевой терапии и до завершения исследования. Также требовался начальный уровень гематологических, почечных и печеночных функций в пределах нормы. Исследование проводилось в Онкологическом Центре Университета Миннесоты и Университете Бастир. Исследование было одобрено комитетами по этике. В период с января 2008 года по июнь 2010 года, одиннадцать женщин с I-III стадией рака молочной железы, отвечающие узким критериям отбора, согласились на участие в исследовании и были последовательно разделены на группы. По три испытуемого в каждой группе 3 гр, 6 гр, 9 гр. Два пациента вышли из исследования после двух посещений из-за трудностей с транспортировкой до клиники. Характеристики девяти женщин, прошедших исследование, включали: возрастной диапазон от 38 до 68 лет; шесть эстроген-рецептороотрицательных и три эстроген-рецептороположительных; три со стадией I; две со стадией II и четыре со стадией III рака молочной железы. Одна из женщин, участвующих в исследовании, не проходила курс химиотерапии перед лучевой терапией, и о нарушении протокола отбора было сообщено комитет по этике.

2.3. Выходные показатели. Основной целью исследования была оценка безопасности и переносимости Trametes versicolor женщинами с раком молочной железы после курса лучевой терапии. Девять участников в исследовании с эскалацией дозы подвергались наблюдению на наличие побочных эффектов (ПЭ) с использованием клинических и лабораторных методов и критерии дозолимитирующей токсичности (ДЛТ) определялись как какое-либо из Класса 2 или большей токсичности, связанной с лечением, измеренной с помощью Общей терминологии критериев нежелательных явлений V 3.0 (ОТКНЯ). Женщины обследовались еженедельно на наличие побочных эффектов во время введения препарата в клинике или по телефону между визитами. Вторичной целью являлся сбор предварительных данных, которые сравнивали исходные показатели до и после лучевой терапии, иммунологические показатели в процессе лечения и после лечения, включая полный анализ крови с подсчётом форменных элементов, активность естественных клеток-киллеров (NK), регуляторный анализ Т-клеток, анализ субпопуляции  Т/B/NK-клеток, фагоцитарный индекс и уровни цитокинов. Статистический анализ, в том числе независимые выборки t-критериев и Однофакторный дисперсионный анализ с апостериорными множественными сравнениями, проводился с использованием GraphPad Prism, Версия 5.04 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, Калифорния). В целях увеличения мощности и объема выборки, данные обсервационного исследования (N = 14), проводимого нашими центрами с 2006 г. [16] объединились с нынешним исследованием с эскалацией дозы (N = 9). Критерии отбора были одинаковыми для обоих исследований (N = 23).

2.4. Грибное лекарственное средство. Высушенный порошок мицелия Trametes versicolor был получен от Paul Stamets на Fungi Perfecti, Inc., г. Олимпия, штат Вашингтон, и был инкапсулирован Beehive Botanicals (г. Хэйвард, штат Висконсин). Каждая капсула содержит 500 мг продукта. Подтверждение FDA (Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств) (# 75,405) было получено в 2007 году.

2.5. Иммунные анализы

2.5.1. Общий анализ крови с подсчётом форменных элементов. Клинические лабораторные тесты (клинический анализ крови, химический анализ, сывороточные тесты на беременность и анализы мочи) были проведены на кафедре лабораторной медицины в Университете Вашингтона для испытуемых, отобранных для Университета Бастир и в диагностической лаборатории Университета Миннесоты для испытуемых, отобранных для Университета Миннесоты.

2.5.2. Функциональная активность естественных клеток-киллеров. Измеренные субпопуляции иммуноцитов включали активность NK-клеток, регуляторный анализ Т-клеток, анализ субпопуляции  Т/B/NK-клеток, фагоцитарный индекс и уровни цитокинов.  Иммунологические анализы проводились в университетской лаборатории Бастир для пациентов, участвующих в исследовании на обоих территориях. Кровь, собранная в Главном центре по клиническим исследованиям Университета Миннесоты, была отправлена в Университет Бастир. Качество перевозимой крови из Университета Миннесоты в Бастир оценивалась по следующим критериям. Для образцов старше 48 часов, по прибытии в лабораторию Бастир, лимфоциты были изолированы и жизнеспособность клеток определяли окраской трипановым синим. Если жизнеспособность была менее 80%, образцы отвергались. Мононуклеарные клетки периферической крови (МНПК) были изолированы градиентом Фиколл-гипак (плотность = 1.070г/мл), два раза промыты в PBS и выдерживались в RPMI-растворе 1640, 10% FBS с 2 мМ L-глутамина и пенициллин-стрептомицина (1000 ед/мл; 1 мг/мл). Активность NK-клеток этих образцов МНПК, с определяемой способностью убивать опухолевые клетки-мишени K562, была оценена в трёх параллелях в соотношениях эффектор-мишень (E:T)  50:1, 25:1, и 12.5:1 по результатам публиковавшихся методов [17]. Мишеневидные клетки были помечены 3,3’-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate (DiOC18) и сокультивированы с эффекторными клетками МНПК в течение четырех часов. Контрольный образец только с клетками К562 был включен для определения самопроизвольного некроза клетки-мишени. После инкубирования, был добавлен пропидиум иодид для обнаружения мертвых клеток. Процент погибших клеток-мишеней определялся путем вычитания процентного самопроизвольного лизиса из процента специфического лизиса (ПСЛ) соответствующего отношения E:T. Для представления активности стандартизированных NK-клеток, единицы лизиса вычислялись ранее указанной и аттестованной программы, используя следующие параметры: мишеней = 10,000; ЕЛ на кол-во клеток = 107; кривая максимум = 48; процентное содержание лизиса = 20 [17]. Значения ЕЛ20, определяемые как соотношение E:T, при котором наступает смерть 20% клеток-мишеней, были экстраполированы исходя из кривой зависимости "доза-эффект" ПСЛ против логарифмического E:T соотношения для каждой проанализированной пробы крови [18].

2.5.3. Иммунофенотипированные субпопуляции МНПК. Суспензии  МНПК (5 х 105 клеток) были помещены в 3 трубки, промыты в PBS, центрифугированы, надосадочная жидкость считалась контрафактной, а сгустки клеток ресуспендировали в 100 μЛ PBS. МНПК в трубке 1 были помечены CD3-РС5, CD4-PE и CD8-FITC; в трубке 2: CD3-РС5, CD16-FITC и CD56-PE; в трубке 3: CD14-РС5. Трубки недолго встряхивали, закупорили и поместили на лед на 15 минут, после чего клетки дважды промыли в холодном PBS, ресуспендировали до 0,5 мл в PBS и процент субпопуляций МНПК определялся проточным цитометрическим анализом с использованием Beckman Coulter FC500 и программным обеспечением СХР.

2.6. Протокол клинического исследования. Продолжительность исследования составляла девять недель и оно началось после окончания курса лучевой терапии. В него входили шесть недель применения препарата с последующим трехнедельным «отмывочным» периодом без применения препарата (Рис. 1). После завершения химиотерапии и до начала лучевой терапии пациенты были обследованы и признаны пригодными для исследования. Во время проведения исследование, требовалось шесть визитов пациентов в клинические исследовательские центры. Первый визит произошел до начала курса лучевой терапии, при котором были записаны исходные лабораторные показатели. В течение первой недели после завершения лучевой терапии, состоялся второй визит испытуемых, во время которого были записаны лабораторные показатели и в начато девятинедельное исследование. Шесть недель препарата ТР было назначено пациенту, который вернулся в научно-исследовательский центр для третьего, четвертого и пятого визита, с интервалом в две недели для записи показателей и оценки переносимости препарата и наличия побочных эффектов. Последний (шестой) визит на девятой неделе, после трех недель без препарата, для последней записи лабораторных показателей и обнаружения наличия каких-либо длительных побочных эффектов.

Протокол эскалации дозы включал группы из не менее трех участников, принимающих ТР перорально небольшими дозами ежедневно в течение шести недель. Группы первой дозы принимала 3 гр/сут в два приема; вторая группа - 6 г/сут в два приема; третья - 9 г/сут в три приема. Три грамма в сутки - это наиболее часто используемая доза в натуропатической медицине и до 9 грамм в Японии. Целью исследования было определить безопасную максимально переносимую дозу (МПД) (Таблица 1).

3. Результаты

3.1. Побочные эффекты. Результаты этого исследования с эскалацией дозы показали, что дозы препарата ТР до 9 грамм в сутки хорошо переносятся женщинами с раком молочной железы в течение шести недель после курса лучевой терапии. Было обнаружено девять побочных эффектов; семь легких, один умеренный и только один эффект класса 3, которые являлось вспышками тревоги у одного пациента, что, скорее всего, не было связано с экспериментальным препаратом (Таблица 2). Другие отмеченные легкие неблагоприятные последствия включали кратковременную изжогу, сильное сердцебиение, запор, боль в груди, лихорадку, радиационный дерматит и симптомы простуды/гриппа. Все три дозы хорошо переносились и участники не испытывали затруднения при глотании до 9 капсул по три раза в день. Следует отметить, что не наблюдалось ни тошноты, ни расстройства желудочно-кишечного тракта; два побочных эффекта было отмечено в предыдущих клинических испытаниях других экстрактов ТР.

3.2. Иммунный ответ. Компартмент красных кровяных клеток не был поврежден Лучевой Терапией (ЛТ) и препаратом из ТР. Абсолютный подсчет эритроцитов, гемоглобина и гематокрита был в норме при первом визите, который был накануне ЛТ, и продолжал падать в пределах нормы на протяжении всего исследования. Абсолютный подсчет лейкоцитов и нейтрофилов, как правило, был в пределах нормы у всех женщин как до, так и после ЛТ и в течение недель после ЛТ, во время которых они принимали ТР (данные не показаны). Тем не менее, абсолютное содержание лимфоцитов показало отличную структуру от других субпопуляций общего анализа крови. Так как критерии отбора были идентичны в исследованиях, проведимыми нашими центрами начиная с 2006 года, в целях увеличения статистической мощности, мы совместили данные от нашего обсервационного исследования (N = 14), которое показало, что ЛТ вызывала иммунные нарушения у женщин с I-III стадиями рака молочной железы [16], с нашим нынешним исследованием с эскалацией дозы (N = 9). У суммарного числа из 23 женщин в обоих исследованиях с I-III стадиями рака молочной железы состояние после операции на молочной железе и химиотерапии, которые затем прошли курс лучевой терапии, лимфоциты были в пределах нормы перед ЛТ, но снизились до аномально низкого уровня после ЛТ. Среднее содержание лимфоцитов для всех 23 пациентов перед ЛТ составляло 1,027 ± и 0,298 и снизилось на 20% после ЛТ 0,681 ± 0,254 - статистически значимое различие [t(44) = 4.236, P < 0,001]. В исследовании с эскалацией дозы, две высшие дозы (6 и 9 гр) ТР повлекли за собой скорейшее восстановление содержания лимфоцитов (Рис. 2). Число лимфоцитов постепенно восстанавливалось у наблюдаемой группы, но среднее количество лимфоцитов осталось ниже, чем у групп, принимающих 6 и 9 гр в течение 6 недель после ЛТ. Из-за небольшого числа пациентов для каждой дозы (N = 3), статистическая значимость была обнаружена только между наблюдаемой и 9-граммовой группами через 2 недели после ЛТ. Лучевая терапия статистически значимо снизила абсолютное количество лимфоцитов у женщин с I-III стадиями рака молочной железы, которые прошли операцию и химиотерапию (Рис. 2).



Рис. 1: Протокол исследования



Группа
ТР гр/сут
Интервалы эскалации дозы (правило эскалации в следующей таблице)
1
3
Начальная доза (применяемая в клинической практике)
2
6
Начинаются после того, как минимум 1 из 3 испытуемых в группе закончит 2-недельный прием препарата без дозолимитирующей токсичности (ДЛТ - определяется как любая токсичность, связанная с лечением > класс 1)
3
9
Начинаются после того, как минимум 2 из 3 испытуемых в группе закончат 2-недельный прием препарата без дозолимитирующей токсичности

Таблица 1: Первая стадия исследования с эскалацией дозы

Функциональная активность естественных клеток-киллеров резко снижается в период до-после ЛТ у всех 23 больных раком молочной железы, сделавших первые два визита либо при обсервационном исследовании (N = 14), либо при исследовании с эскалацией дозы (N = 9). Рис. 3 показывает, что средняя активность NK-клеток составляла 19,941±18,959 до ЛТ и снизилась до 9,872 ± 13.454 после ЛТ (N = 23). Это снижение было статистически значимым (t(44) = 2,077, Р = 0,043). Тенденция к росту активности NK-клеток наблюдалась в группе, принимающей 6 гр ТР.

Лучевая терапия статистически значимо снижала функцию NK-клеток, представленной ЕЛ, которая рассчитывается 107 разделенных доз ЕЛ20. ЕЛ20 – это число эффекторных клеток (NK), необходимых для достижения 20% специфического лизиса клеток-мишеней (K562). Поэтому, чем меньше ЕЛ20, тем более эффективны NK-клетки. Интерпретация этого результата была трудной из-за различной реакции пациентов на грибные добавки. Тенденция временного повышения активности NK-клеток наблюдалась в группе дозы 6 гр. (Рис. 3)

Мы также измерили эффекты от радиотерапии и ТР по T, B и NK-клеточным популяциям у девяти пациентов, которые завершили первую стадию исследования с  эскалацией дозы. Из иммунофенотипированных данных лейкоцитов и проточной цитометрии было рассчитано абсолютное значение (мм3). Лучевая терапия оказала незначительное воздействие на Т-клетки CD4+ и CD8+, B-клетки CD19+ и CD16+/56+ NK-клеточные популяции. Так как иммунофенотипирование не проводилось в обсервационном исследовании, число суммарных (до и после ЛТ) баллов было только тех пациентов, которые участвовали в исследовании с эскалацией дозы (N = 9). Количество Т-клеток CD8+ не было статистически отличным до и после лучевой терапии (Рис. 4). Однако, увеличение Т-клеток CD8+ и B-клеток CD19+ наблюдалось в периферической крови у групп, принимающих добавку ТР. Число Т-клеток CD8+ в течение 9-недельного исследования с эскалацией дозы было увеличено в группе 9 гр ТР, по сравнению с группами 3 г или 6 г. Однофакторный дисперсионный анализ был использован для изучения полной разницы между группами на протяжении периода лечения (2-4-6 недель). Он показал статистически значимое увеличение CD8+ цитотоксических Т-клеток у группы 9 г, по сравнению с группами 3 г и 6 г (F(2, 6) = 42,04, P = 0,0003). Разница между группами 3 г и 6 г не была статистически значимой (Рис. 4).

По суммарным баллам восьми испытуемых в исследовании с эскалацией дозы, лучевая терапия существенно не изменила число B-клеток (Рис. 5). Однако, прием ТР был связан с увеличением CD19+ B-клеток. Однофакторный дисперсионный анализ был использован для изучения полной разницы группами на протяжении периода лечения (2-4-6 недель). Он показал статистически значимое увеличение CD19+ B-клеток у группы 6 г, по сравнению с группой 3 г [F(2, 6) = 6,312, P = 0,0334]. Разница между группами 3 г и 9 г, а также группами 6 г и 9 г не была статистически значимой (Рис. 5).

Класс эффекта
Кол-во
Доза
Описание
Связь
Ожидание
Легкий
7
3 г
Изжога
Возможно связанный
Непредвиденный


3 г
Сильное сердцебиение
Маловероятно связанный
Непредвиденный


6 г
Запор
Маловероятно связанный
Непредвиденный


6 г
Боль в груди
Возможно связанный
Непредвиденный


6 г
Лихорадка с сопутствующим лучевым дерматитом (2)
Маловероятно связанный
Непредвиденный


9 г
Симптомы простуды/гриппа
Маловероятно связанный
Непредвиденный
Умеренный
1
6 г
Усталость; на фоне UT инфекции
Маловероятно связанный
Непредвиденный
Серьезный
1
6 г
Вспышка тревоги
Возможно связанный
Непредвиденный
Итого
9

Таблица 2: нежелательные последствия



Рис. 2
Рис. 3


Относительно числа CD16+56+ NK-клеток, никаких существенных изменений, вызванные лучевой терапией или приемом ТР, не наблюдалось (Рис. 6). Так как активность NK-клеток уменьшилась из-за ЛТ и увеличилась в группе 6 г ТР (Рис. 3), но на NK-клеточные популяции, как оказалось, эти методы лечения значительно не повлияли, данные показывают, что активность NK-клеток повышалась не из-за вызванных лечением изменений числа NK-клеток. NK-клеточная популяция не подвергалась воздействию лучевой терапии или перорального приема ТР (Рис. 6).

4. Комментарии

Результаты этого исследования установили безопасность перорального применения препарата из гриба Trametes versicolor (ТР) в дозах по 3, 6, 9 грамм, без появления каких-либо серьезных побочных эффектов этой терапии у женщин, прошедших лучевую терапию для лечения рака молочной железы. Настоящее исследование подтверждает наш предыдущий отчет о том, что стандартная грудная лучевая терапия для рака груди не влияет на компартмент красных кровяных клеток или нейтрофилов, но индуцирует специфические иммунные нарушения, включая лимфопению и снижение функциональной активности NK-клеток [16, 19]. NK-клеточные терапии распространяются по всему миру в качестве перспективного противоопухолевого лечения, эксплуатируя быстрое цитолитическое действие NK-эффекторов и их потенциально применимость в отношении широкого спектра онкологических заболеваний [20-22]. Наше новое открытие заключается в том, что потеря активности NK-клеток, как оказывается, не зависит от числа NK-клеток. Так, ЛТ снижает активность NK-клеток по NK-клеткам. Большие дозы ТР по 6 и 9 грамм/сутки были связаны с быстрым восстановлением активности лимфоцитов и NK-клеток, а также увеличением числа CD8+ Т-клеток и CD19+ B-клеток. Не было обнаружено очевидное влияние ТР на количество CD 16+/56+ NK-клеток, только на их функциональную активность. Хотя и существует тенденция того, что повышенные дозы ТР имеют более выраженную иммунологическую активность, эта первая стадия исследования с эскалацией дозы не была предназначена оценить дозозависимые изменения иммунных маркеров. Предварительные данные от этой малой выборки из 3 больных раком молочной железы показывают дозозависимые тенденции, приводящие к проверяемой гипотезе о том, что 6 граммов ТР могут привести к более быстрому иммунному восстановлению после лучевой терапии. Результаты этой первой стадии испытания обосновывают и выступают в качестве платформы, благодаря которой вторая стадия рандомизированного контролируемого доза-ответ испытаний может продолжиться.

Хотя это исследование показало безопасность 9-граммовой суточной дозы Trametes versicolor, исследование с эскалацией дозы было предназначено обнаружить максимальную переносимую дозу (МПД); поэтому данное исследование не определяет безопасность и переносимость препарата в самой высокой дозе. Отбор женщин для группы 12 грамм и выше не был проведен из-за нескольких ограничивающих факторов. Во-первых, женщины должны были соответствовать строгим критериям отбора, чтобы участвовать в исследовании и пройти операцию, химиотерапию и лучевую терапию. В настоящее время, многие женщины с диагнозом рака молочной железы не получают тройной терапии. Многие женщины с диагнозом 1 стадии рака молочной железы проходят лампэктомию и лучевую терапию, и если их онко-балл низкий, они не отказываются от курса химиотерапии. Кроме того, многие женщины участвовали в других исследованиях и были приглашены в дополнительные испытания. Самое главное, мы обнаружили, что женщины после завершения длительного лечения химиотерапией и облучения, неохотно участвовали в девятинедельном исследовании, которое потребовало шесть дополнительных посещений университета.


Рис. 4                                                                Рис. 6



Рис. 5

Данные первой стадии показывают, что ТР безопасен для иммунотерапии больных раком молочной железы, которые могут исправить иммунные нарушения, вызванные ЛТ. Опираясь на наши результаты, грибная терапия перорального приема ТР после ЛТ может увеличить число лимфоцитов и противоопухолевую активность NK-клеток. Рецидив после первичного лечения рака молочной железы может быть связан с нарушениями врожденного и адаптивного иммунитета. Исследования нашего центра указывают на то, что Trametes versicolor представляет новейшую иммунную терапию с важным практическим применением в лечении рака.

Одобрение Этического комитета

Все эксперименты проводились в соответствии с действующим законодательством США.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа получила финансовую поддержку со стороны Национальных Институтов Здравоохранения/Национального Центра комплементарной и нетрадиционной медицины (U19 AT 1998) и Грант на исследования рака № G-04-002. Авторы также благодарят за помощь в редактировании Ребекку Пратт (Rebekah Pratt) из отделения семейной медицины Университета Минессоты и Даниила Стренжа (Daniel Strenge) за его вклад.

Библиографический список

[1] P. M. Kidd, “The use of mushroom glucans and proteoglycans in cancer treatment,”/ «Использование грибных глюканов и протеогликанов в лечении рака» Alternative Medicine Review, vol. 5, no. 1, pp. 4–27, 2000.

[2] K. K. W. Chu, S. S. S. Ho, and A. H. L. Chow, “Coriolus versi- color: a medicinal mushroom with promising immunothera- peutic values,”/ «Coriolus versicolor: лекарственный гриб с перспективными иммунотерапевтическими характеристиками» Journal of Clinical Pharmacology, vol. 42, no. 9, pp. 976–984, 2002.

[3] M. Fisher and L. X. Yang, “Anticancer effects and mech- anisms of polysaccharide-K (PSK): implications of cancer immunotherapy,”/ «Противоопухолевые эффекты и механизмы полисахарида-K (PSK): последствия от иммунотерапии рака» Anticancer Research, vol. 22, no. 3, pp. 1737– 1754, 2002.

[4] B. Z. Zaidman, M. Yassin, J. Mahajna, and S. P. Wasser, “Medicinal mushroom modulators of molecular targets as cancer therapeutics,”/ «Модуляторы лекарственного гриба таких молекулярных мишеней, как терапии рака» Applied Microbiology and Biotechnology, vol. 67, no. 4, pp. 453–468, 2005.

[5] T. Morimoto, M. Ogawa, K. Orita et al., “Postoperative adju- vant randomised trial comparing chemoendocrine therapy, chemotherapy and immunotherapy for patients with stage II breast cancer: 5-year results from the nishinihon cooperative study group of adjuvant chemoendocrine therapy for vreast cancer (ACETBC) of Japan,”/ «Послеоперационное адъювантное рандомизированное исследование сравнения химиоэндокринной терапии, химиотерапии и иммунотерапии больных со II стадией рака молочной железы: 5-летние результаты группы кооперативного исследования nishinihon адъювантной химиоэндокринной терапии рака груди (ACETBC) Японии» European Journal of Cancer, vol. 32, no. 2, pp. 235–242, 1996.

[6] M. Toi, T. Hattori, M. Akagi et al., “Randomized adjuvant trial to evaluate the addition of tamoxifen and PSK to chemother- apy in patients with primary breast cancer: 5-year results from the Nishi-Nippon group of the adjuvant chemoendocrine therapy for breast cancer organization,”/ «Рандомизированное адъювантное испытание оценки дополнение тамоксифена и PSK к химиотерапии у больных первичным раком молочной железы: 5- летние результаты группы Nishi-Nippon адъювантной химиоэндокринной терапии при раке молочной железы» Cancer, vol. 70, no. 10, pp. 2475–2483, 1992.

[7] K. Ogoshi, H. Satou, K. Isono et al., “Immunotherapy for esophageal cancer. A randomized trial in combination with radiotherapy and radiochemotherapy. Cooperative Study Group for Esophageal Cancer in Japan,”/ «Иммунотерапия рака пищевода. Рандомизированное исследование в сочетании с лучевой терапией и химиолучевой терапии. Совместные Исследования Группы Рака Пищевода в Японии» American Journal of Clinical Oncology, vol. 18, no. 3, pp. 216–222, 1995.

[8] H. Kobayashi, K. Matsunaga, and Y. Oguchi, “Antimetastatic effects of PSK (Krestin), a protein-bound polysaccharide obtained from basidiomycetes: an overview,”/ «Антиметастатические эффекты PSK (Крестин), связанный с белком полисахарид, полученный из базидиомицетов: обзор» Cancer Epidemi- ology Biomarkers and Prevention, vol. 4, no. 3, pp. 275–281, 1995.

[9] L. J. Standish, L. N. Alschuler, A. B. Ready et al., “Botanical medicine in integrative oncology,”/ «Фитотерапия в интегративной онкологии» in Integrat ed Oncology, D. I. Abrams and A. T. Weil, Eds., pp. 104–146, Oxford University Press, New York, NY, USA, 2009.

[10] H. Lu, Y. Yang, E. Gad et al., “Polysaccharide krestin is a novel TLR2 agonist that mediates inhibition of tumor growth via stimulation of CD8 T cells and NK cells,”/ «Полисахарид крестин – новейший TLR2 агонист, приводящий к торможению роста опухоли через стимулирование CD8+ Т-клеток и NK-клеток» Clinical Cancer Research, vol. 17, no. 1, pp. 67–76, 2011.

[11] C. J. M. Melief, “Tumor eradication by adoptive transfer of cytotoxic T lymphocytes,”/ «Радикальное удаление опухоли адоптивным переносом цитотоксических Т-лимфоцитов» Advances in Cancer Research, vol. 58, pp. 143–175, 1992.

[12] S. Cunningham-Rundles, D. A. Filippa, and D. W. Braun, “Natural cytotoxicity of peripheral blood lymphocytes and regional lymph node cells in breast cancer in women,” / «Естественная цитотоксичность лимфоцитов периферической крови и региональных лимфатических узлов клеток рака молочной железы у женщин» Journal of the National Cancer Institute, vol. 67, no. 3, pp. 585–590, 1981.

[13] H. Yamazaki, Y. Yoshioka, T. Inoue et al., “Changes in natural killer cell activity by external radiotherapy and/or brachytherapy,”/ «Изменения в активности естественных клеток-киллеров внешней лучевой терапией и/или брахитерапией» Oncology Reports, vol. 9, no. 2, pp. 359–363, 2002.

[14] E. Tichatschek, C. C. Zielinski, C. Muller et al., “Long-term influence of adjuvant therapy on natural killer cell activity in breast cancer,”/ «Долгосрочное влияние адъювантной терапии на активность естественных клеток-киллеров при раке молочной железы» Cancer Immunology Immunotherapy, vol. 27, no. 3, pp. 278–282, 1988.

[15] B. L. Andersen, W. B. Farrar, D. Golden-Kreutz et al., “Stress and immune responses after surgical treatment for regional breast cancer,”/ «Стресс и иммунные реакции после хирургического лечения местно-распространённого рака молочной железы» Journal of the National Cancer Institute, vol. 90, no. 1, pp. 30–36, 1998.

[16] L. J. Standish, C. Torkelson, F. A. Hamill et al., “Immune defects in breast cancer patients after radiotherapy,”/ «Иммуные нарушения при раке груди у пациентов после лучевой терапии» Journal of the Society for Integrative Oncology, vol. 6, no. 3, pp. 110–121, 2008.

[17] S. A. Motzer, J. Tsuji, V. Hertig, S. K. Johnston, and J. Scanlan, “Natural killer cell cytotoxicity: a methods analysis of 51 chromium release versus flow cytometry,”/ «Цитотоксичность естественных клеток-киллеров: методы анализа с радиоактивным хромом против проточной цитометрии» Biological Research for Nursing, vol. 5, no. 2, pp. 142–152, 2003.

[18] J. Bryant, R. Day, T. L. Whiteside, and R. B. Herbermann, “Calculation of lytic units for the expression of cell-mediated cytotoxicity,”/ «Расчет единиц лизиса для экспрессии клеточно-опосредованной цитотоксичности» Journal of Immunological Methods, vol. 146, no. 1, pp. 91–103, 1992.

[19] L. J. Standish, C. A. Wenner, E. S. Sweet et al., “Trametes versicolor mushroom immune therapy in breast cancer,”/ «Иммунная терапия Trametes гриб при раке молочной железы» Journal of the Society for Integrative Oncology, vol. 6, no. 3, pp. 122–128, 2008.

[20] G. Suck and M. B.C. Koh, “Emerging natural killer cell immunotherapies: large-scale ex vivo production of highly potent anticancer effectors,”/ «Распространение иммунотерапии естественных клеток-киллеров: масштабное производство вне организма сильнодействующих противоопухолевых эффекторов» Hematology, vol. 3, no. 3, pp. 135– 142, 2010.

[21] S. Cooley and D. S. Weisdorf, “Natural killer cells and tumor control,”/ «Естественных клетки-киллеры и подавление опухоли» Current Opinion in Hematology, vol. 17, no. 6, pp. 514–521, 2010.

[22] L. Barkholt, E. Alici, R. Conrad et al., “Safety analysis of ex vivo-expanded NK and NK-like T cells administered to cancer patients: a phase I clinical study,”/ «Анализ безопасности произведенных вне организма NK и NK-подобных Т-клеток, при ведении пациентам с раком: первая стадия клинического исследования» Immunotherapy, vol. 1, no. 5, pp. 753–764, 2009.