Кай Минг Сиу (Kai Ming Siu), Дункан Х.Ф. Мак Чиу (Duncan H.F. Mak, P.Y. Chiu), Микель К.Т. Пуун (Michel K.T. Poon), Ю. Ду (Y. Du), Кам Минг Ко (Kam Ming Ko)

Кафедра Биохимии, Гонконгский университет Науки и Технологии, Clear Water Bay, Гонг Конг, Китай

Получено 7 января 2004; принято 2 июля 2004.

Аннотация

Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc. (Кордицепс), известный китайский тонизирующий гриб, в китайской медицине ценился за его свойства «питания Инь» и «укрепления Янь». В целях определения фармакологической основы этих функций Кордицепса, на мышах были исследованы эффекты дикорастущего и культивируемого Кордицепса на конканавалин А (Con A)-стимулированные спленоциты, биооценка функции «питания Инь» в искусственных условиях и способность генерации миокардиального АТФ, биооценка функции «укрепления Янь» вне организма. Результаты показали, что метанольные экстракты из дикорастущего и культивируемого Кордицепса улучшают пролиферацию Con A-стимулированных спленоцитов в искусственных условиях и генерацию миокардиального АТФ вне организма у мышей, без существенной разницы в активности действия между двумя типами Кордицепса. В то время как иммуно-стимулирующий эффект был связан с увеличением выработки интерлейкина-2, стимулирование генерации миокардиального АТФ сопровождалось усовершенствованием митохондриального переноса электронов. При сравнении с обычными «Инь» и «Янь»-тонизирующими китайскими травами было обнаружено, что Кордицепс обладает функциями и «питания Инь», и «укрепления Янь», с меньшей активностью обоих механизмов действий. Фармакологическая характеристика Кордицепса, полученная  посредством современного биотестирования, согласуется с проверенными временем клиническими наблюдениями китайских фитотерапевтов.

Ключевые слова: Cordyceps sinensis; пролиферация спленоцитов; миокард; АТФ; Инь; Янь.


Вступление

Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc. (Кордицепс), знаменитый китайский тонизирующий гриб для общего поддержания здоровья, состоит из сушеных грибов, растущих на личинках гусеницы (бабочки Hepialus armoricanus Oberthur). Когда гриб растет из гусеницы в летнее время, паразитический комплекс выглядит как растение. Кордицепс, таким образом, также зовется в Китае «зимой - червяк, летом - трава» из-за его различного сезонного внешнего вида. Согласно теории китайской медицины, тонизирующие растения, которые используются для различных недугов, как правило, подразделяются на четыре категории в зависимости от их оздоравливающих функций: питание Инь; обогащение крови; укрепление Янь; оздоровление Ци (Geng и Su, 1991). Из этих четырех типов тонизирующих растений, «обогащение крови» и «оздоровление Ци» сгруппированы под семейство Инь и семейство Янь, соответственно. С глобальной точки зрения, Янь рассматривается как воплощение функций организма, поддерживаемых со стороны различных органов, принадлежащих части Инь. С точки зрения физиологической функции, насосное действие сердца относится к Янь, а пролиферативный ответ иммунных клеток на антигенную стимуляцию - к Инь. В практике китайской медицины, Кордицепс, который может укрепить почки и смягчить легкие, назначают для лечения целого ряда заболеваний, включая гиполибидомию, гипергликемию, гиперлипидемию, слабость после болезни, болезни органов дыхания, нарушение функции почек, заболевания печени и сердца (Zhu и соавт., 1998). По этой причине Кордицепс рассматривается как тонизирующее растение с функциями «питания Инь» и «укрепления Янь» (Государственное управление Традиционной китайской медицины и фармацевтики, Китай, 1995). Фармакологические исследования показали, что Кордицепс обладает широким спектром биологической активности, в том числе антиокислительным свойством (Yamaguchi и соавт., 2000; Li и соавт., 2001a,b), иммунопотенциированием (Gong и соавт., 1990; Xu и соавт., 1992 г.; Chen и соавт., 1991; Shin и соавт., 2003), ингибированием роста опухоли (Ohmori и соавт., 1986; Yoshida и соавт., 1989 г.; Chen и соавт., 1997; Shin и соавт., 2003), противовоспалительное действие (Kim и соавт., 2003) и стимуляция биосинтеза тестостерона (Huang и соавт., 2001). Последние исследования, проведенные в нашей лаборатории, показали, что большинство тонизирующих китайских растений с функцией «питания Инь» может повысить степень Con A-стимулированной пролиферации спленоцитов у мыши в искусственных условиях и вне организма (Yim и Ко, 2002). В то время как растения «укрепления Янь» обладают относительно высокой активностью захвата свободных радикалов, в отличие от других тонизирующих лекарственных трав (Yim и Ко, 2002 г.), они также могут улучшить генерацию миокардиального АТФ вне организма (Ko и соавт., 2004). В целях определения фармакологической основы для функций «питания Инь» и «укрепления Янь» у Кордицепса, мы исследовали влияние экстракта Кордицепса на Con А-стимулированную пролиферацию спленоцитов в искусственных условиях и генерацию миокардиального АТФ вне организма у мышей. Кроме того, культивированный Кордицепс также был включен в исследование для сравнения. Cynomorium songricum Rupr. (Циноморий) и Ligustrum lucidum Ait. (Бирючина блестящая) были использованы в качестве положительного контроля для «питания Инь» и «укрепления Янь», соответственно.

Материалы и методы

Химические вещества и растительные материалы

Питательная среда RPMI-1640, термоинактивированная фетальная телячья сыворотка (ФТС), Con А, АТФ и АДФ были приобретены у компании Sigma Chemical Co. (Сент-Луис, Миссури, США). Клеточная пролиферация набора I на основе МТТ (3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бромид была приобретена у компании Boehringer Mannheim Gmbh (Германия). Растворители, используемые для высокоэффективной жидкостной хроматографии, прошли квалификацию «для ВЭЖХ». Все остальные химические вещества были аналитической степени чистоты. Дикорастущие Кордицепс, Циноморий и Бирючина блестящая были импортированы из Китая. Они были заверены и предоставлены торговым посредником (компания Lee Hoong Kee, Ltd.) из Гонг Конга. Контрольные образцы были переданы на хранение на Кафедру Биохимии Гонконгского университета Науки и Технологии. Культивированный Кордицепс, который является продуктом ферментации мицелия Cordyceps sinenesis (изолированного из Кордицепса, собранного в провинции Цинхай, Китай), был подарком от доктора Карла В.K. Цима (Karl W.K. Tsim) с кафедры Биологии Гонконгского университета Науки и Технологии.

Экстракция из лекарственных трав


Травы был высушены в печи при 60 C в течение ночи, а затем измельчены в порошок. Культивированный Кордицепс поставлялся в виде порошка. Порошок из трав нагревался с конденсатом в 300 мл метанола при 60 C в течение 2 часов. Процедуру повторяли дважды. Общий метиловый экстракт высушивали путем выпаривания растворителя при пониженном давлении, чтобы получить растительные экстракты из дикорастущего Кордицепса, культивированного Кордицепса, Циномория и Бирючины блестящей при выходе 17%, 20%, 41% и 26% соответственно.

Лабораторные животные

В настоящем исследовании были использованы взрослые самки белых мышей (25-28 гр). Животные содержались при 22 C и с 12-часовым циклом чередования света и темноты и неограниченным количеством пищи и воды в Учреждении содержания лабораторных животных Гонконгского университета Науки и Технологии.

Измерение в искусственных условиях иммунологической активности в Con А-стимулированных спленоцитах у мыши

Процедуры, связанные с изоляцией спленоцитов, были проведены в асептических условиях. Селезеночные ткани, полученные от взрослой самки белой мыши (25-28 гр) были препарированы пластиковым шприцем в чашку для культивирования (60 мм), содержащую 10 мл питательной среды RPMI-1640, и аккуратно натянуты на 200 сетку из нержавеющей стали, чтобы избавиться от комков и получить клеточную суспензию. Продукт был помещен на лед в течение 5 минут, чтобы удалить фрагменты ткани. Суспензии клеток центрифугировали при 600 г в течение 10 мин и промыли 3 раза с RMPI-1640, а затем, наконец, ресуспендировали в RPMI-1640 с добавлением 10% ФТС в концентрации 2х107 жизнеспособных клеток/мл. Жизнеспособность изолированных спленоцитов, которая определяется тестом вытеснения трипанового синего, оказалась выше 95%. Мышиные спленоциты культивировали в среде с Con A в присутствии или отсутствии травяного экстракта в 96-луночном титрационном микропланшете (с плоским дном) в конечном объеме 100 µЛ. Con А (подготовленный в фосфатно-солевом буферном растворе) был добавлен в конечные концентрации 1, 2, 4 и 8 µг/мл соответственно. Аликвоты соответствующих травяных экстрактов (10 µЛ в водном растворе) были добавлены на возрастающие конечные концентрации в диапазоне от 25 до 200 µг/мл. Контрольные лунки были добавлены с 10 µЛ стерилизованной бидистиллированной водой. Спленоциты были затем культивированы в течение 72 часов при 37 C в увлажненной атмосфере с 5% СО2 в воздухе. В конце периода культивирования, степень пролиферации спленоцитов была определена колориметрически, путем анализа с МТТ. Аликвота (10 µЛ) с МТТ маркированным реагентом был добавлен в каждую лунку в темноте. После 4 часов инкубации, 100 µЛ был добавлен солюбилизированный буферный раствор (10% додецилсульфата натрия в 0,01 М HCl) и смеси инкубировали в 5% СО2 при 37 C всю ночь для растворения цветных кристаллов. Степень пролиферации спленоцитов была определена путем измерения абсорбции при 570 нм, используя планшет-ридер. Индекс стимуляции (ИС) рассчитывался по формуле: ИС=средняя абсорбционная способность клеток, простимулированных Con A/средняя абсорбционная способность клеток, не простимулированных Con А. Степень Con А-стимулированной пролиферации изолированных спленоцитов оценивалась путем вычисления площади под кривой (AUC1) на графике стимулирующих индексов против концентраций Con А.

Измерение уровня интерлейкина-2 (ИЛ-2)

Изолированные мышиные спленоциты культивировали с травяными экстрактами (200 µг/мл, конечная концентрация) в присутствии или отсутствии Con A (2, 4 µг/мл) в течение 24 часов. Затем был измерен уровень ИЛ-2 в среде культивирования с помощью набора иммуноферментного анализа (BD OptEIАТМ Set mouse IL-2) (компания BD Biosciences, Сан Диего, Калифорния, США). Цветная реакция была выполнена с использованием 3,3’,5',5-тетраметилбензидина (фирма Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) в качестве субстрата.

Измерение способности генерации миокардиального АТФ

Мышам вводили перорально травяной экстракт (растворенный в воде) в суточной дозе 1 г/кг в течение 3 дней. Контрольным животным - только воду. Через двадцать четыре часа после последнего приема, животных забили смещением шейных позвонков и их сердца были удалены и сразу же помещены в очень холодный изотоничный гомогенизирующий буферный раствор (0,32 М сахарозы, в 1 мМ ЭДТА, 50 мМ Tris/HCl, рН 7,4, 0,2 мг/мл соевого ингибитора трипсина, 0,2 мг/мл бацитрацина, 0,16 мг/мл бензамидина). 5% (м/о) миокардиального гомогената было приготовлено гомогенизацией желудочковой ткани в изотоничном буферном растворе с гомогенизатором с тефлоновым пестиком при 4000 об/мин на 30 полных тактов. Миокардиальный гомогенат центрифугировали при 13000 об/мин в течение 1 минуты с помощью настольной центрифуги для получения безъядерных гомогенатов. Способность генерации миокардиального АТФ, косвенный показатель митохондриального окислительного фосфорилирования (Konig и соавт., 1993), была проанализирована при инкубации 200 µЛ безъядерных гомогенатов с 200 µЛ субстратного раствора (содержащего 80 мМ глутамата и 27 мМ соли яблочной кислоты) и 100 µЛ 30 мМ АДФ в течение 10 минут при 37 C. Предварительные исследования показали, что линейное увеличение производства АТФ в реакционной смеси произошло с увеличением периодов инкубации до 20 мин (данные не показаны). После 10-минутной инкубации реакция останавливалась добавлением 35 µЛ хлорной кислоты (30%). Реакционные смеси затем центрифугировали при 600 г в течение 10 минут. Аликвота (120 µЛ) надосадочной жидкости была смешана с 90 µЛ 1,4 М KHCO3 для нейтрализации. Смеси снова центрифугировали при 600 г в течение 10 минут. Надосадочная жидкость была измерена на содержание АТФ методом анализа ВЭЖХ (Нова-Пак столбец: 3.9х300 мм; градиентная элюция с 2-компонентной подвижной фазой: (A) 1 мМ ЭДТА, 6 мМ тетрабутиламмония гидросульфата в 35 мМ KPO4, рН 6,0; (B) ацетонитрил: А (50:50, о/о); скорость потока: 1,0 мл/мин), с поправками, внесенными методом Ally и Park (1992). Уровень АТФ оценивается по стандартной калибровочной кривой и содержание белка безъядерных гомогенатов было определено с помощью Bio-Rad protein assay kit (компания Hercules, Калифорния, США). Способность генерации миокардиального АТФ была выражена в нмоль/мг белка.

Измерение митохондриального электронного переноса.

Измерение переноса электронов в изолированных митохондриях, который основан на сокращении красителя (3-[4,5-диметилтиазол-2-Ил]-2,5-дифенилтетразол бромид; МТТ), было выполнено путем, описанным Cohen и соавт. (1997). Митохондриальная фракция была приготовлена из сердечного гомогената с помощью дифференциального центрифугирования и ресуспендирования в инкубационный буферный раствор (250 мМ сахарозы, 50 мМ HEPES, 10 мМ KH2PO4, 2 мМ MgCl2, 1 мМ EGTA, рН 7,4) при содержании белка 2 мг/мл. Аликвота (80 µЛ) ресуспендированной митохондриальной фракции смешали с 200 µЛ каждого 15 мМ пирувата и 0,42 мг/мл МТТ. Реакционную смесь инкубировали при 37 C в течение 60 минут при слабом потряхивании. После инкубации реакция была остановлена добавлением 200 µЛ лизирующего буфера (10% м/о, додецилсульфата натрия и 45% диметилформамида, скорректированной до рН 4.7 с ледяной уксусной кислотой). После выстаивания в течение 5 минут, показание оптической плотности реакционной смеси при 550 нм и 620 нм были взяты в двух экземплярах с планшет-ридером (Bio-Rad, Hercules, Калифорния, США) и степень редукции МТТ была оценена разницей между OD550 и OD620. Данные были выражены в виде процента от среднего значения образцов без растительной предварительной обработки.

Результаты и комментарии

Как показано на рис. 1, Con А стимулировал пролиферацию мышиных спленоцитов, как показано дозозависимым увеличением в стимулирующем индексе. В то время как метанольный экстракт дикорастущего или культивируемого Кордицепса сам по себе не оказал заметного влияния на пролиферацию мышиных спленоцитов, оба экстракта Кордицепса вызвали дозозависимое повышение Con А-стимулированной пролиферации мышиных спленоцитов в искусственных условиях (рис. 1а, b).



Рис. 1. Эффекты дикорастущего/культивируемого Кордицепса и растений с функциями Инь/Янь на Con А-стимулируемую пролиферацию мышиных спленоцитов. Con A-стимулированная пролиферация мышиных спленоцитов была проанализирована в искусственных условиях, и степень клеточной пролиферации оценивали путем, описанным в части «Материалы и методы». Каждая точка среднего+- SEM, с данными, полученными из 5 экспериментов с использованием различного производства спленоцитов. *ug/ml – мкг/мл.

Когда степень Con А-стимулированной пролиферации оценивалась путем расчета площади под Con А кривой зависимости «доза-эффект», степень Con А-стимулированной пролиферации значительно выросла - на 190% и 177% соответственно, в присутствии дикорастущего или культивируемого Кордицепса в конечной концентрации 200 µЛ/мл. Экстракт Бирючины блестящей, растения положительного контроля для функции «питания Инь», не оказывая заметного эффекта на пролиферацию спленоцитов в отсутствие Con A, вызвал дозозависимое ускорение Con А-стимулированной пролиферации спленоцитов (рис. 1с), с повышением в 2,9 раза Con А-стимулированной пролиферации спленоцитов в 200 µЛ/мл (рис. 2). Для сравнения, экстракт Циномории, выступающей в качестве растения отрицательного контроля с функцией «укрепления Янь», производила лишь незначительное положительное влияние на Con А-стимулированную пролиферацию спленоцитов, по сравнению с другими травами (рис. 1d). Когда степень ускорения Con А-стимулированной пролиферации спленоцитов оценивалась путем расчета площади под кривыми на рис. 2, дикорастущий Кордицепс явно показал более сильное иммунологическое усиление, чем культивируемый Кордицепс (данные не показаны). Однако, различие не было статистически значимым.

Пролиферация спленоцитов - это комплексное мероприятие, которое предполагает взаимодействие таких лимфокинов, как интерлейкин-1 и интерлейкин-2 и экспрессии их рецепторов (Smith, 1988). Способность экстракта Кордицепса ускорять Con А-стимулированную пролиферацию спленоцитов может быть опосредована модуляцией экспрессии лимфокинов и/или функции. Как показано на рис. 3а, Con А вызвал дозозависимое увеличение выработки ИЛ-2 в культивируемых мышиных спленоцитах. Хотя оба экстракта дикорастущего и культивируемого Кордицепса не произвели заметных изменений в выработке ИЛ-2 в отсутствие Con А (данные не показаны), они значительно увеличили уровень ИЛ-2 в Con А-стимулированных спленоцитах (при 4 µЛ/мл), со степенью повышения на 37% и 20% соответственно при 200 µЛ/мл (рис. 3b).

Рис. 2. Иммунологическое усиление дикорастущего/культивируемого Кордицепса и Инь/Янь тонизирующих трав. Степень Con А-стимулированной пролиферации спленоцитов оценивалась путем расчета данных из рис. 1, как описано в разделе «Материалы и методы». Каждая черта – это среднее +-SEM, n = 5. * и # обозначают p<0,001 при сравнении с группой Бирючины блестящей и Циномории соответственно, с использованием критерия Стьюдента.

Рис. 3. Эффекты дикорастущего/культивируемого Кордицепса и Инь/Янь тонизирующих трав на выработку ИЛ-2 в Con А-стимулированных спленоцитах мыши. (a) Con А отдельно (0.5-8 µг/мл) или (b) Con А (4 µг/мл) с экстрактами трав при 200 µг/мл инкубировали со спленоцитами в течение 24 часов до начала измерения уровня ИЛ-2. Данные были представлены в виде средних значений (+- SEM) трех образцов от одного характерного эксперимента. *p<0,05, **p<0.01 при сравнении с контрольной группой (т.е.. Con А отдельно) с помощью критерия Стьюдента.

В то время как экстракт Бирючины блестящей повысил Con А-стимулированную выработку ИЛ-2 на 44% при 200 µЛ/мл, экстракт Циномория также увеличил уровень ИЛ-2 на 49%, независимо от его неспособности улучшить Con А-стимулированную пролиферацию спленоцитов (рис. 3b). В этой связи пероральный прием экстракта Кордицепса, полученного вытяжкой горячей водой, также модулировал производство интерлейкина-6 путем активации макрофагов у мыши (Koh и соавт., 2002). Активные ингредиенты, такие как нуклеозиды (Li и соавт., 2001b) и полисахариды (Li и соавт., 2003) в Кордицепсе, возможно, потенцируют Con А-инициированную экспрессию лимфокинов и/или функции в спленоцитах, повышая, таким образом, митогенетический ответ. Увеличение выработки ИЛ-2 Циноморием, не сопровождаемое параллельным усилением в Con А-стимулированной пролиферации спленоцитов, может быть связано с факторами, влияющими на функции ИЛ-2 в спленоцитах. В то время как дикорастущий и культивируемый Кордицепс был слабее в иммунологической активации, чем Циноморий, они были значительно более мощными, чем Циноморий, который демонстрировал едва уловимое иммунологическое усиление в плане пролиферации спленоцитов (рис. 2). Более раннее исследование в нашей лаборатории показало, что тонизирующие травы с функцией «питания Инь» могут улучшить Con А-стимулированный митогенетический ответ мышиных спленоцитов как в искусственных условиях, так и вне организма (Yim и Ко, 2002). В настоящем исследовании вывод о том, что Бирючина блестящая, но не Циноморий, продемонстрировала отчётливо выраженное действие иммунологической стимуляции для дальнейшей поддержки использования митогенного анализа спленоцитов для оценки действий «питания Инь». В то время как дикорастущий и культивируемый Кордицепс обладает иммунологической активностью аналогичной эффективности, оба типа Кордицепса могут рассматриваться как «питающие Инь», с более низкой активностью, чем Бирючина блестящая, типичное «питающее Инь» растение.

Лечение мышей экстрактом дикорастущего или культивируемого Кордицепса усилило способность генерации миокардиального АТФ вне организма, о чем свидетельствует значительный рост (29% и 32% соответственно) в уровне АТФ после инкубации миокардиальных гомогенатов с субстратами в течение 10 минут (рис. 4а). Лечение Бирючиной блестящей (отрицательный контроль для «укрепления Инь») не оказывает заметного воздействия на генерацию миокардиального АТФ, экстракт Циномория (положительный контроль для «укрепления Инь») вызвал заметную стимуляцию (130%) генерации миокардиального АТФ, при сравнении с контрольной группой (рис. 4а). Предварительная обработка экстракта Кордицепса и Циномория повысила пируват-поддерживаемый митохондриальный перенос электронов со степенью стимуляции 21-24% (рис. 3b). Измерение генерации АТФ в миокардиальных гомогенатах, используя соль яблочной кислоты и глутамат в качестве субстратов, является косвенным показателем состояния 3 митохондриального дыхания, которое приводит к потреблению кислорода и образованию АТФ.

Рис. 4. Эффекты дикорастущего/культивируемого Кордицепса и Инь/Янь тонизирующих трав на способность генерации миокардиального АТФ и митохондриального переноса электронов у мышей. Животным перорально вводили травяной экстракт в суточной дозе 1 г/кг в течение 3 дней. Способность генерации миокардиального АТФ (a) и митохондриального переноса электронов (b) были измерены, как описано в разделе «Материалы и методы». Среднее значение редукции МТТ, косвенного показателя митохондриального переноса электронов и выраженные в  OD550–620, в митохондриальной фракции, от без предварительно обработанных мышей 0.194 +- 0.003. Данные значения средние +-SEM, c n = 5. *, ** и *** обозначением p<0,05; р<0,01 и p<0.005 соответственно, в сравнении с контрольной группой; # p<0.01 в сравнении с группой Циномории, используя критерий Стьюдента.
В рамках имеющихся экспериментальных условий, способность Кордицепса и «питающих Янь» трав повышения способности генерации миокардиального АТФ может быть опосредована увеличением активности ферментных комплексов дыхательной цепи и, следовательно, способностью окислительного фосфорилирования. Это подтверждается нашим результатом, который показывает, что генерирующий-стимулирующий АТФ эффект Кордицепса и Циномория был связан с улучшением митохондриального переноса электронов, по оценке редукции МТТ (рис. 4b). Для сравнения, Бирючина блестящая не стимулировала генерацию АТФ или не существенно улучшила митохондриальный перенос электронов (рис. 4). В соответствии с нашим наблюдением, лечение Кордицепсом может улучшить устойчивое биоэнергетический статус в печени мыши, по оценке измерения в естественных условиях с помощью 31P ядерно-магнитной спектроскопии (Manabe и соавт., 1996; Dai и соавт., 2001). Антиоксидантный потенциал Кордицепса, как сообщалось ранее Li и соавт. (2001a), может быть связан с его функцией «укрепления Янь» (Yim и Ко, 2002; Ko и соавт., 2004). Вывод о том, что «укрепляющие Янь», но не «питающие Инь» травы могут увеличить способность генерации миокардиального АТФ, предполагает использование анализа генерации миокардиального АТФ для оценки функции «укрепления Янь». Как и в случае иммунологической активации, дикорастущий и культивируемый Кордицепс обладают активностью усиления генерации миокардиального АТФ аналогичной эффективности. Оба типа Кордицепса могут рассматриваться как «укрепляющие Янь» я более низкой активностью, чем Циноморий, обычное «укрепляющее Янь» растение.

В заключение, результаты показали, что дикорастущий и культивируемый Кордицепс производит иммунологическую стимуляцию и усиление генерации миокардиального АТФ без существенных различий в активности действия между двумя типами гриба. При сравнении с обычными «укрепляющими Янь» и «питающими Инь» тонизирующими китайскими травами, Кордицепс обладает функцией и «питания Инь», и «укрепления Янь», с более низкой эффективностью в обоих механизмах действий. Фармакологическая характеристика Кордицепса средствами современного биоанализа согласуется с клиническими наблюдениями китайских фитотерапевтов.

Библиографический список

Ally, A., Park, G., 1992. Rapid determination of creatine, phosphocreatine, purine bases and nucleotides (ATP, ADP, AMP, GTP, GDP) in heart biopsies by gradient ion-pair reversed-phase liquid chromatography./Быстрое определение оснований креатина, фосфокреатина, пурина и нуклеотидов (АТФ, АДФ, АМФ, ГТФ, GDP) в сердечных биопсиях градиентом ион-парной противофазной жидкостной хроматографии. Journal of Chromatography 575, 19–27.
Chen, G.Z., Chen, G.L., Sun, T., Hsieh, G.C., Henshall, J.M., 1991. Effects of Cordyceps sinensis on murine T lymphocyte subsets./Эффекты Cordyceps sinensis на мышиных субпопуляциях Т-лимфоцитов. Chinese Medicine Journal (Engl.) 104, 4–8.
Chen, Y.J., Shiao, M.S., Lee, S.S., Wang, S.Y., 1997. Effect of Cordyceps sinensis on the proliferation and differentiation of human leukemic U937 cells./Эффект Cordyceps sinensis на пролиферации и дифференциации лейкозных клеток U937 человека Life Sciences 60, 2349–2359.
Cohen, G., Farooqui, R., Kesler, N., 1997. Parkinson disease: A new link between monamine oxidase and mitochondrial electron flow./ Болезнь Паркинсона: новое звено между монамин оксидазы и митохондриального потока электронов. Proceeding of National Academy of Sciences USA 94, 4890–4894.
Dai, G., Bao, T., Xu, C., Cooper, R., Zhu, J.S., 2001. CordyMax Cs-4 improves steady-state bioenergy status in mouse liver./CordyMax Cs-4 улучшает устойчивое состояние биоэнергетического статуса в печени мыши. Journal of Alternative and Complementary Medicine 7, 231–240.
Geng, J., Su, Z., 1991. Practical Traditional Chinese Medicine and Pharmacology, Volume 1: Basic Theories and Principles./Практическая Традиционная китайская медицина и Фармакология, том 1: фундаментальные теории и принципы. New World Press, Beijing, China, pp. 208–234.
Gong, M., Zhu, Q., Wang, X.L., Ma, J.X., Zhang, W.J., 1990. Molecular structure and immunoactivity of the polysaccaride from Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc./ Молекулярная структура и иммунная активность полисахарида Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc. China Biochemistry Journal 6, 144–150.
Huang, B.M., Hsu, C.C., Tsai, S.J., Sheu, C.C., Leu, S.F., 2001. Effects of Cordyceps sinensis on testosterone production in normal mouse Leydig cells./ Эффекты Cordyceps sinensis на производство тестостерона в здоровых клетках Лейдига у мыши Life Sciences 69, 2593–2602.
Kim, K.M., Kwon, Y.G., Chung, H.T., Yun, Y.G., Pae, H.O., Han, J.A., Ha, K.S., Kim, T.W., Kim, Y.M., 2003. Methanol extract of Cordyceps pruinosa inhibits in vitro and in vivo inflammatory mediators by suppressing NF-kappaB activation./ Метиловый экстракт Cordyceps pruinosa ингибирует в искусственных условиях и в естественных условиях медиаторы воспаления путем подавления активации NF-каппаB. Toxicology and Applied Pharmacology 190 (1), 1–8.
Ko, K.M., Mak, D.H., Chiu, P.Y., Poon, M.K., 2004. Pharmacological basis of dYang-invigorationT in Chinese medicine./ Фармакологическая основа «укрепления Янь» в китайской медицине. Trends in Pharmacological Sciences 25, 3–6.
Koh, J.H., Yu, K.W., Suh, H.J., Choi, Y.M., Ahn, T.S., 2002. Activation of macrophages and the intestinal immune system by an orally administered decoction from cultured mycelia of Cordyceps sinensis./ Активация макрофагов и иммунной системы кишечника перорально вводимым отваром из культивируемого мицелия Cordyceps sinensis. Bioscience Biotechnology and Biochemistry 66, 407–411.
Konig, T., Kapus, A., Sarkadi, B., 1993. Effects of equisetin on rat liver mitochondria: evidence for inhibition of substrate anion carriers of the inner membrane./ Эффекты equisetin на митохондрий печени крыс: свидетельство ингибирования субстратом анионновых носителей внутренней оболочки. Journal of Bioenergetics and Biomembranes 25, 537–545.
Li, S.P., Li, P., Dong, T.T., Tsim, K.W., 2001a. Anti-oxidation activity of different types of natural Cordyceps sinensis and cultured Cordyceps mycelia./ Антиоксидантная активность различных типов природных Cordyceps sinensis и культивируемого мицелия Cordyceps. Phytomedicine 8, 207–212.
Li, S.P., Li, P., Dong, T.T., Tsim, K.W., 2001b. Determination of nucleosides in natural Cordyceps sinensis and cultured Cordyceps mycelia by capillary electrophoresis./ Определение нуклеозидов в природных Cordyceps sinensis и культивируемом мицелии Кордицепса путем капиллярного электрофореза. Electrophoresis 22, 144–150.
Li, S.P., Zhao, K.J., Ji, Z.N., Song, Z.H., Dong, T.T., Lo, C.K., Cheung, J.K., Zhu, S.Q., Tsim, K.W., 2003. A polysaccharide isolated from Cordyceps sinensis, a traditional Chinese medicine, protects PC12 cells against hydrogen peroxide-induced injury./ Полисахарид, изолированный из Cordyceps sinensis, традиционная китайская медицина, защищает клетки PC12 от перекись водорода-индуцированных повреждений. Life Sciences 73, 2503–2513.
Manabe, N., Sugimoto, M., Azuma, Y., Taketomo, N., Yamashita, A., Tsuboi, H., Tsunoo, A., Kinjo, N., Nian-Lai, H., Miyamoto, H., 1996. Effects of the mycelial extract of cultured Cordyceps sinensis on in vivo hepatic energy metabolism in the mouse./ Эффекты экстракта мицелия культивируемого Cordyceps sinensis в естественных условиях на печеночный энергетический обмен у мыши. Japanese Journal of Pharmacology 70, 85–88.
Ohmori, T., Tamura, K., Tsuru, S., Nomoto, K., 1986. Antitumor activity of protein-bound polysaccharide from Cordyceps ophioglossoides in mice./ Противоопухолевая активность связанного с белком полисахарида из Cordyceps ophioglossoides у мышей. Japanese Journal of Cancer Research 77, 1256–1263.
Shin, K.H., Lim, S.S., Lee, S., Lee, Y.S., Jung, S.H., Cho, S.Y., 2003. Anti-tumour and immuno-stimulating activities of the fruiting bodies of Paecilomyces japonica, a new type of Cordyceps spp./ Противоопухолевая и иммуностимулирующая активность плодовых тел Paecilomyces japonica, новый тип Cordyceps spp. Phytotherapy Research 17, 830–833.
Smith, K.A., 1988. Interleukin-2: inception, impact, and implications./ Интерлейкин-2: образование, влияние и последствия Science 240, 1169–1176.
Xu, R.H., Peng, X.E., Chen, G.Z., Chen, G.L., 1992. Effects of Cordyceps sinensis on natural killer activity and colony formation of B16 melanoma./ Эффекты Cordyceps sinensis на активность естественных клеток-киллеров и образование колоний меланомы В16. Chinese Medicine Journal (Engl.) 105, 97–101.
Yamaguchi, Y., Kagota, S., Nakamura, K., Shinozuka, K., Kunitomo, M., 2000. Antioxidant activity of the extracts from fruiting bodies of cultured Cordyceps sinensis./ Антиоксидантная активность экстрактов из плодовых тел культивируемого Cordyceps sinensis. Phytotherapy Research 14, 647–649.
Yim, T.K., Ko, K.M., 2002. Antioxidant and immunomodulatory activities of Chinese tonifying herbs./ Антиоксидантное и иммуномодулирующее действие китайских тонизирующих трав. Pharmaceutical Biology 40, 329–335.
Yoshida, J., Takamura, S., Yamaguchi, N., Ren, L.J., Chen, H., Koshimura, S., Suzuki, S., 1989. Antitumor activity of an extract of Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc. against murine tumor cell lines./ Противоопухолевая активность экстракта Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc. против мышиных опухолевых клеточных линий. Japanese Journal of Experimental Medicine 59, 157 – 161.
Zhu, J.S., Halpern, G.M., Jones, K., 1998. The scientific rediscovery of an ancient Chinese herbal medicine: Cordyceps sinensis: part I./ Научное открытие древней китайской травяной медицины: Cordyceps sinensis: часть I. Journal of Alternative and Complementary Medicine 4, 289–303.