Ваш путь по сайту nazdorovye.ru:

Джун-Лян Го

Многочисленные исследования свидетельствуют о противораковом действии тритерпеноидов. Предыдущее исследование нашей лаборатории показало, что дегидроэбурикоиковая кислота (DeEA), тритерпеноид выделенный из Antrodia cinnamomea (известный в Тайване как "Ню-чан-Чин"), может вызвать некротическую гибель клеток человеческой глиобластомы U87MG посредством перегрузки ионами Ca 2+, митохондриальной дисфункции и активации калпаина.

В данных тезисах мы стремимся к дальнейшему изучению механизмов DeEA-опосредованной гибели клеток U87MG. Кроме того, мы исследовали антипролиферативное действие двух DeEA-производных соединений, метил дегидроэбурикоиковой (М- DeEA) и моноацетата дегидроэбурикоиковой кислоты (MA- DeEA).


Жизнеспособность клеток и оценка цитотоксичности показали, что все три соединения могут ингибировать пролиферацию U87MG клеток. Анализы с применением световой микроскопии показали, что три соединения оказывают различные морфологические эффекты: соединение DeEA вызывало округление и разрыв клеток; M-DeEA также индуцировало укорочение клеток, но без значительного разрыва, а MA- DeEA индуцировало неравномерное удлинение клетки или их изолированное округление.

Поэтому мы перешли к изучению различных антипролиферационных механизмов трех соединений, а также механизмов, вызывающих гибель клеток.

Цитометрический анализ с Аннексином-V и пропидий йодидом показал, что соединение DeEA значительно повышало вероятность некротической гибели клеток, а соединения M- DeEA и МА- DeEA вызывали умеренное увеличение вероятности возникновения апоптоза.

Результаты AO/EtBr окрашивания также подтвердили данные о том, что M-DeEA индуцирует апоптоз. Тем не менее, предварительная обработка ингибитором каспазы zVAD-fmk не смогла существенно снизить МА- DeEA индуцированный апоптоз.

С другой стороны, анализ клеточного цикла при помощи PI маркировки предполагает, что MA-DeEA индуцирует остановку клеточного цикла в G2/M фазе.


Иммунофлюоресцентное окрашивание LC3B показало, что DeEA существенно увеличивает количество аутофагосом. Изучение митохондриального мембранного потенциала при помощи митотрэкера показало, что как DeEA, так и МА-DeEA нарушали функции митохондрий, что, в свою очередь, может вызвать гибель клеток.

Иммунофлюоресцентное окрашивание PARP и AIF в дальнейшем показало, что как DeEA, так и МА-DeEA индуцировали транслокацию AIF из митохондрий в ядро, что особенно усиливало экспрессию PARP.


Таким образом, мы определили различные механизмы гибели клеток на примере U87MG клеток, вызываемой соединениями DeEA, M-DeEA и MA-DeEA: DeEA вызывает PARP/AIF опосредованный некроз; M-DeEA вызывает апоптоз; а MA-DeEA, вероятно, вызывает остановку клеточного цикла в G2/M фазе