Сяо-Дун Цзоу

Меланома является наиболее серьезной формой рака кожи. Аберрантная активация Wnt / β-катенинового сигнального каскада наблюдается примерно в одной трети случаев меланомы, что указывает на то, что модуляция Wnt/β-катениновой активации может представлять новую стратегию в лечении меланомы. Нижестоящие мишени Wnt/β-катенинового сигнального пути, в том числе с-Мус, cyclinD1, ММР и сурвивин, которые регулируют большое количество разнообразных клеточных функций, например, пролиферацию, дифференцировку, выживаемость и апоптоз. Antrodia camphorata, известный в Тайване лекарственный гриб, который использовался в качестве китайской народной медицине в течение многих лет.

Предыдущие исследования показали, что А. camphorata (AC) обладает значительной противоопухолевой активностью в отношении различных опухолевых клеток. Тем не менее, механизм противоопухолевой активности А. camphorata в отношении меланомы изучен недостаточно хорошо. Кроме того, в настоящее время поиск оптимальных методов лечения меланомы является актуальным темой научно-исследовательских исследований в связи с высокой устойчивостью данной опухоли к лучевой и химиотерапии, а также к большинству синтетических химиотерапевтических препаратов, от действия которых больше страдают немеланомные клетки кожи. По этой причине в настоящем исследовании мы нацелились на изучении противоопухолевой эффективности ферментированного культурального экстракта А. camphorata (AC-10) и полученного из него чистого соединения (AC-0) на клетках меланомы мыши. В первом ряду экспериментов мы сделали наблюдение, что лечение AC-10  значительно снизило жизнеспособность клеток мышиной меланомы B16F10 и B16F1, при этом значение IC 50  составило 80 мкг/мл. Снижение жизнеспособности клеток было непосредственно связано с ингибированием β-катенина и подавлением экспрессии относящегося к нему белка.

Иммунофлуоресцентный анализ подтвердил, что лечение AC-10 заметно снижает транслокацию β-катенина в ядрышко, а также подавляет β-катенин-опосредованную  транскрипционную активность. Кроме того, протеасомальный ингибитор MG132, который предотвращает протеасомальную деградацию β-катенина, т.е., наоборот, GSK3β ингибитор SB216312 также подавляет деградацию β-катенина, что явно подразумевает GSK3β зависимый путь деградации β-катенина. Аналогичным образом, лечение при помощи AC-10 подавляет экспрессию GSK3β, что дает основания предположить, что АС-10 может регулировать протеосомную деградацию β-катенина по GSK3β-зависимому механизму. Кроме того, анализ с применением проточной цитометрии показал, что лечение AC-10 существенно ограничивает переход G1 в S-фазу с последующим подавлением циклина D1 (мишенью является ген wnt / β-катенин), экспрессии CDK4 и увеличении уровней p27, p21.

Кроме того, анализ TUNEL показал, что лечение препаратом AC-10 индуцирует апоптоз в дозозависимой форме, с последующим нарушением соотношения BAX/BCL-2 и механизма регуляции про-каспазы-9, про-каспазы-3 и про-PARP. Анализ миграции и инвазии показывает, что АС-10 может уменьшать способность меланомы к метастазированию посредством ингибирования экспрессии ММР-9, ММР-2, VEGF, которые являются также генами-мишенями Wnt/β-катенинов. Во второй части испытания также было обнаружено, что AC-0 эффективно ингибировал Wnt/β-катениновый каскадный путь и подавлял β-катенин-опосредованную транскрипционную активность.

Как и в случае с АС-10, было обнаружено, что в клетках, обработанных АС-0, уменьшался процесс метастазирования меланомы, а также усиливалась индукция апоптоза. Лечение MG132 и AC-0 предотвращает экспрессию β-катенина, однако тот факт, что SB216312 не смог предотвратить экспрессию GSK3β предполагает, что лечение AC-0 может регулировать протеосомную деградацию β-катенина посредством GSK3β-независимого механизма. Это явление наблюдается и при помощи анализа иммунопреципитации, подтверждающем, что обработка клеток AC-0 снижает взаимодействие между β-катенином и GSK3β.

В исследовании в условиях in vivo AC-0 подавлял  рост B16F10 клеток, полученных из опухолей у бестимусных («голых») мышей. Подавление роста опухолевых клеток B16F10 было связано с понижающей регуляцией целевых генов Wnt / β-катенинов, таких как с-Myc, циклин D1, ММР-9. Лечение AC-0 также индуцирует апоптоза B16F10 клеток, полученных из опухолей у «голых» мышей. В заключение, наши данные показали, что АС-10 и его основной компонент AC-0 заметно модулирует Wnt / β-катениновый путь в клетках меланомы.

Поэтому мы считаем, что AC-10/AC-0 может быть потенциальным химиопрофилактическим средством для лечения меланомы.