Takeshi Takaku,* Yoshiyuki Kimura и Hiromichi Okuda ^†

^†Второй отдел Медицинской Биохимии и ^*Центральная научно-исследовательская лаборатория, Школа Медицины, Университет Ehime, Shigenobu-cho, Onsen-gun, Ehime 791-0295, Япония

Резюме: Базидиомицеты гриба Agaricus blazei Murill, традиционно использовались как здоровая пища для предотвращения рака, диабета, гиперлипидемии, артериосклероза и хронического гепатита. В настоящем исследовании мы изучили антиопухолевые воздействия различных веществ, выделенных из липидной фракции А. blazei. Рост опухоли замедлялся при оральном приеме липидной фракции, извлеченной из А. blazei со смесью хлороформа/метанола у мышей – носителей саркомы-180. Вещество с антиопухолевым воздействием в липидной фракции было выделено через колоночную хроматографию геля кварца, элюировано со смесью ацетонитрила/метанола (3:2) и было определено как эргостерол путем прямого сравнения 1H NMR (ЯМР) и масс-спектрометрии спектральных данных подлинного образца. Оральный прием эргостерола в дозах 400 и 800 мг/кг мышами носителями саркомы-180 значительно сокращала рост опухоли, он применялся для 20 d без побочных эффектов, таких как потеря массы тела, эпидидимальной жировой ткани, тимус, увеличение селезенки и увеличение числа лейкоцитов, вызванного лекарствами, применяемыми в раковой химиотерапии. Эргостерол не проявил никакой цитотоксичности против клеток опухоли. Чтобы разъяснять антиопухолевую деятельность эргостерола, мы исследовали его влияния на стимулированном опухолью ангиогенезе, используя две модели in vivo. Внутрибрюшинное применение эргостерола в дозах 5, 10 и 20 мг/кг для 5 последовательных d замедляли неоваскуляризацию, вызванную тампонами с клетками карциномы легкого Льюиса. Это позволило предположить, что или эргостерол, или его метаболиты могут быть задействованы в замедлении неоваскуляризации, вызванной опухолью. Поэтому, мы далее исследовали сдерживающее влияние эргостерола на неоваскуляризацию вызванную Matrigel. Женским особям мышей C57BL/6 подкожно делались прививки с Matrigel, содержащим кислотный фибробласт фактора роста и гепарин с или без эргостерола. Эргостерол замедлял неоваскуляризацию, вызванную Matrigel, указывая на то, что он непосредственно замедляет процесс неоваскуляризации. В связи с этими результатами представляется вероятным, что антиопухолевое действие эргостерола возможно является следствием прямого замедления ангиогенеза вызванного цельными опухолями. Это - первое сообщение об эргостероле как о антиангиогенезном веществе.. J. Nutr. 131:1409-1413, 2001.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: • Agaricus blazei

• антиопухолевое воздействие

• антиангиогенезное воздействие

• антиопухолевое вещество

• мыши

Базидиомицеты гриба Agaricus blazei Murill (японское имя: Himematsutake или Agarikusutake) традиционно использовались как источник здоровой пищи в Бразилии для предотвращения рака, диабета, гиперлипидемии, артериосклероза и хронического гепатита. Сообщается, что каждый год в Японии производится до 100 000-300 000 кг сушеных грибов A. Blazei. Этот гриб используется – 300 000 - 500 000 человеками для предотвращения рака и/или в качестве вспомогательного средства к лекарствам для химиотерапии рака после удаления злокачественной опухоли. Употребление жидкого экстракта A. blazei --3-5 г три раза ежедневно. Горячая вытяжка A. blazei имеет сильное антиопухолевое воздействие, это было проверено на мышах – носителях сарокмы-180 (1-4), и антиопухолевым веществом была объявлена β - (l-6)-глюкан фракция. Однако антиопухолевое воздействие липидной фракции не было еще хорошо изучено. Мы исследовали антиопухолевые воздействия различных веществ, изолированных от липидной фракции A. blazei подаваемых орально и внутрибрюшинно, чтобы идентифицировать активные вещества. Сначала мы изолировали эргостерол, как антиопухолевое вещество, от липидной фракции A. blazei. Эргостерол содержится в различных грибах, таких как Lentinus edodes (Berk). Sing. (японское имя: Shiitake), и Polyporus umbellatus Fries (японское имя: Chorei), и эргостерол - предшественник эргокальциферола. Кроме того, мы изучили побочные эффекты этих веществ из A. blazei (например, угнетение костного мозга, угнетение иммунной системы и снижение массы тела). Чтобы разъяснять механизм антиопухолевого воздействия изолированным активным веществом (эргостеролом), мы исследовали влияние эргостерола на иммунном действии селезенки и спровоцированной опухолью неоваскуляризации.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Общие экспериментальные процедуры. Точки плавления, которые были определены с помощью Yamato MO-21 капиллярного аппарата (Наука Yamato, Токио, Япония), неизменны. Инфракрасные и ультрафиолетовые спектры были измерены с помощью Shimadzu IR-400 спектрометра (Киото, Япония) и JASCO ORD/UV-5 спектрометра (Токио, Япония), соответственно. ¹H ЯМР (499.83 МГц) спектры были зарегистрированы в CDCl₃ с помощью Varian Unity Inova 500 спектрометром (TOSO, Токио, Япония). Массовые спектры были измерены с помощью Hitachi М-4000 H спектрометра (Токио, Япония). Хроматография колонки была выполнена, с использованием кварцевого геля 60 (70-230 размер сита; Американское общество по испытанию материалов, Merck, Германия). Другие химикалии были классифицированы как реактивы.

Естественные материалы и изоляция антиопухолевых веществ от A. blazei. A. blazei поставлялся Bizen Chemical (Окаяма, Япония). Контрольные образцы сохранены во Втором Отделе Медицинской Биохимии, Школа Медицины, Университета Ehime, Японии. Высушенные грибы A. blazei (1 кг) были непосредственно экстрагированы при помощи хлороформа/метанола (1:1, v/v) (2 L X 3) в течение 3 часов с обратным холодильником. Экстракт хлороформа/метанола был сконцентрирован под уменьшенным давлением, чтобы обеспечить коричневый экстракт (250 g). Экстракт хлороформа/метанола (200 g) был разделен на растворимую ацетоном (160 g) и – нерастворимую (40 g) фракции. Растворимая ацетоном фракция (35 g) была далее разделена на н-гексан нерастворимую (16 g) и - растворимую (14 g) фракции. Н-гексан нерастворимая фракция (15 g) была хроматографирована на колонке кварцевого геля, и эргостерол (2.4 g) был изолирован как активное вещество. Каждая фракция была проверена на антиопухолевое воздействие на мышах носителях саркомы-180.

Клетки. Очень метастатическая, стойкая к препарату мышиная клетка с карциномой легкого Льюиса (LLC) была получена из Генного Банка Riken (Tukuba, Япония). Она содержались в среде МЕМ в модификации Дульбеко (Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)), с добавлением 10%-ой эмбриональной бычьей сывороткой, пенициллина (1 X 105 U/L), стрептомицина (100 mg/L) и амфотерицина B (0.25 mg/L). Клетки саркомы-180 также содержались в лаборатории Второго Отдела Медицинской Биохимии, Школа Медицины, Университета Ehime.

Материалы. Среда разделения лимфоцита мыши (Lympholytes-Mouse) была куплена от Dainippon Pharmacy Ltd. (Осака, Япония), и флуоресцеин эфира изородановой кислоты (FITC) – помеченные как антимышиные CD4 и CD8 и фикоэритрин –помеченный как антимышиный антиген NK1.1 были куплены в Serotec (Оксфорд, Великобритания) . Мембрана основания Matrigel (сокращенный фактор роста) была получена от Becton Dickinson Лабораторное оборудование (Бедфорд, MA). DMEM было получено от Nissui Pharmaceutical Ltd. (Токио, Япония) и использовалось как среда культуры. Антибиотические и противогрибковые средства были куплены в Sigma Chemicals (Сент Луиc, МО). Эмбриональная бычья сыворотка была куплена в ICN Biochemicals (Аврора, ОН). Круглые нитроклетчаточные мембранные сита (размер сот - 0.45 μ .m) были куплены в Millipore (Бедфорд, MA). Пластины культуры были куплены от Corning Glass Works (Corning, NY). Другие химикаты были классифицированные, как реактивы. β-циклодекстрин поставлялся Ensui Sugar Refining Ltd. (Йокохама, Япония). Эргостерол был в суспензии в 9-граммовом растворе NaCl/L или в дистиллированной воде, содержащей 20 г β- циклодекстрина/L.

Животные. Мужские особи ICR мышей (6 недель), и женские особи C57BL/6 мышей (5 недель) были получены из Японии Clea (Осака, Япония). Они были размещены на одну неделю в комнате, в которой поддерживалась температура 25 ± 1°C, 60%-ая влажность и был свободный доступ к стандартной неочищенной диете (8 грамм воды, 51.3 грамма сырых углеводов, 24.6-грамма сырого белка, 5.6-грамма сырого жира, 3.1-грамма сырой клетчатки, 6.4-грамма минеральной смеси и 1-граммовая смесь витаминов на 100-граммовую диету; Oriental Yeast Ltd., Осака, Япония) и воде. Комната была освещена 12 часов в день, начало освещения в 7 утра. Животных содержали согласно этическим принципам Центра Животных, Школа Медицины, Университета Ehime. Экспериментальный протокол был одобрен Комитетом Исследований на Животных Университета Ehime.

Измерения антиопухолевого воздействия и побочных эффектов различных фракций и активных веществ, изолированных от A. blazei у мышей носителей саркомы 180 LLC. Саркома 180 твердого типа была введена через подкожную трансплантацию клеток размером 1.0 X 10⁶ или 2.5 X 10⁶ прямо в живот мышей при d 0. Различные липидные фракции, такие как экстракты хлороформа/метанола, растворимые ацетоном и - нерастворимые фракции и н-гексан растворимые и - нерастворимые фракции были помещены в воду, содержащую 50 грамм аравийской камеди/L введенную при помощи ультразвука. Эти липидными фракции вводились орально для 20 последовательных d, доза 800 мг/кг, спустя 12 часов после введения клеток опухоли. Эргостерол вводился внутрибрюшинно в дозах 10, 50, 100 или 200 мг/кг или орально в дозах 100, 200, 400 или 800 мг/кг для 20 последовательных d. Контрольные мышам питались только 9-граммовый NaCl/L или водой, содержащей 50 аравийской камеди/L по такому же расписанию.

Объем опухоли был определен при помощи кронциркуля и вычислен при помощи формулы [длина (мм) X ширина (mm²)]/2 каждые 2-3 d. На d 21, кровь была получена венопункцией мышей с использованием анастезии диэтил эфира. Затем опухоль, эпидемиальная жировая ткань, селезенка и тимус были удалены и взвешены для оценки антиопухолевого воздействия и побочных эффектов. Образцы крови были охлаждены в пробирках, содержащих гепарин, и было измерено число лейкоцитов, при помощи Счетчика Коултера (Japan Scientific Instruments Ltd., Токио, Япония).

Твердый тип клеток LLC был также введен путем подкожной трансплантации данных клеток размером 5 X 10⁵ (1 мл) прямо в живот мышей в нулевой день. Эргостерол (50, 200 или 800 мг/кг) вводился орально один раз в день для 24 последовательных d, спустя 12 часов после введения клеток опухоли. Контрольным мышам вводилась дистиллированная вода по одному расписанию. На d 25, мыши погибли из-за цервикальной дислокацией. Их селезенка, тимус и легкие были быстро удалены и взвешены.

Измерение числа лимфоцитов и популяции T-клеток (CD4 +, CD8 + и NK1.1 + T клетки) в C57BL/6 мышах носителях LLC. Селезенку мягко раздражали, чтобы выпустить клетки через вскрытие в холодной PBS. Суспензия клеток (5 мл) была покрыта 5 мл слоем Lympholytes-Mouse и центрифугирована на скорости 1500 х грамм в течение 30 минут. Прослойка лимфоцитов в поверхности раздела была восстановлена, и клетки были ополоснуты три раза в PBS (pH фактор 7.4). Число лимфоцитов было измерено, используя Счетчик Коултера. Концентрация клеток была отрегулирована до 2х10¹⁰ клеток/L, и затем 10 μL FITC-помеченных антимышиных CD8, FITC-помеченных антимышиных CD4 или фикоэритрин –помеченных антимышиных NK1.1 были добавлены к 100 μ \* раствора клеток. После инкубации в течение 30 минут при температуре 4°C, лимфоциты были ополоснуты три раза с 1 мл PBS и центрифугировались в 700 г X в течение 5 мин. Потом CD4 +, CD8 + и NK1.1 +, популяция Т-клеток были проанализированы проточной цитомертрией с FACS Calibur (Becton Dickinson, Mountain View, Калифорния).

Измерение неоваскуляризации вызванной клетками опухоли. Неоваскуляризация, вызванная опухолью in vivo была измерена согласно спинному методу воздушного мешочка. Кратко, 1.5 X 10⁶ культивированных клеток LLC были помещены в DMEM, упакованном в круглую нитроклетчаточную мембранную полость диаметром 14 мм и внедрили в спинной воздушный мешочек мышам в нулевой день. Эргостерол (5, 10 или 20 мг/кг) водился один раз ежедневно при d 1-5. Мыши были убиты при d 6, и волосы на коже контактирующие с полостью были тщательно сбриты. Формирование новых кровеносных сосудов в подкожной области было сфотографировано.

Измерение неоваскуляризации вызваанной Matrigel. Неоваскуляризация, вызванная Matrigel in vivo - былf измерена согласно методам Passaniti и др. (6). Кратко, каждой женской особи мыши C57BL/6 было подкожно введено 0.5 мл Matrigel, содержащего 1 мг кислотного фактора роста фибробласта (aFGF) и 64 X 10³ U гепарина в L в присутствии или отсутствии эргостерол (400 или 800 mg/L). Мыши были убиты при d 5 с передозировкой пентобарбитала. Сгустки были удалены и взвешены. Затем было определено содержание гемоглобина в сгустках, используя комплекты гемоглобиновых тестов (Wako Pure Chemicals, Осака, Япония).

Данные и статистические исследования. Все величины выражены как среднее значение ± SEM. Данные были проанализированы однонаправленным ANOVA, и затем различия в значениях среди групп были проанализированы, используя тест Даннетта или защищенный многократный сравнительный ЛСД тест Фишера (значительно отличный при P <0.05).

Структура изолированного вещества. Изолированное вещество сформировало бесцветные иглы с точкой плавления 157°C. Оно было красноватое фиолетовым с сконцентрированной H₂SO₄ и CH₃COO_H [быстрая спектрометрия массы - облучение атома m/z 489 (М. + H +)]. Изолированное вещество было идентифицировано как эргостерол через прямое сравнение 1H ЯМР спектральные данные подлинного образца. Выход продукта был ~1.5 г/кг высушенного гриба A. blazei.

³ используемые сокращения: aFGF, кислотный фактор роста фибробласта; DMEM, среда в модификации Дульбеко; FITC, флуоресцеин эфира изородановой кислоты; LLC, карцинома легкого Льюиса.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Антиопухолевая активность и побочные эффекты липидных фракций подготовленных из A. blazei в мышах носителях Саркомы 180.. Хлороформ/экстракт метанола (800 мг/кг X 20 d) решительно ингибировал рост опухоли (Таблица 1). Кроме того, оральное введение растворимой ацетоном фракции изолированной от экстракта хлороформа/метанола значительно ингибировало рост опухоли при дозах от 800 мг/кг в течение лечения при 20-d. С другой стороны, рост опухоли не был затронут при оральном введении нерастворимой ацетоном фракции при d 20. Поэтому, растворимая ацетоном фракция, которая имела более высокую антиопухолевую активность, была разделена на две фракции через обработку n-гексан растворимыми и n-гексан нерастворимыми фракциями. N-гексан растворимая и n-гексан нерастворимая фракции (800 мг/кг X 20 d) также подавляли рост опухоли, и их процент подавления вынес 80.2 и 90.1 %, соответственно.

Оральное введение экстракта хлороформа/метанола и различных фракций, приготовленных из экстрактов хлороформа/метанола не имела никакого влияния на питание и прибавление в весе для 20 последовательных d у мышей 1- носителей Саркомы 180 (данные, не показанные).

ФИГУРА 1 Эффекты орального введения эргостерола, изолированного от Agaricus blazei при объеме опухоли 20 d у мышей – носителей Саркомы 180. Саркома 180 твердого типа была подготовлена подкожной трансплантацией 2.5 X 10⁶ клеток в правую часть брюшной полости мышей при d 0. Обозначенные количества эргостерола вводились орально для 20 последовательных d, начиная с 12 часа после внедрения клеток опухоли. Контрольным мышам также вводилась вода, содержащая только 50-граммов авравийской камеди/L в соответствии с тем же расписанием. Объем опухоли был определен прямым измерением с кронциркулем и вычислен формулой [длина (мм) X ширина (mm²)/2] каждые 2-3 d. Результаты выражены как среднее значение ± sem, n = 10. Те, которые не разделяют символ, достоверно различны, P <0.05.

A – только Matrigel

В – Matrigel/a FGR(1 нанограмм/мл) гепарин (64 единицы/мл)

С – D – Matrigel/a FGR/ гепарин + Эргостерол

(400 μg/ml) (800 μg/ml)

ФИГУРА 3 Фотографии сгустков Matrigel 5 d после подкожной инъекции с 0.5 мл только Matrigel (A), Matrigel был дополнен 1 mg/L кислотного фактора роста фибробласта и 64 000 υ/L гепарина (B) или смесью Matrigel/кислотный фактор/гепарин 400 (C) или 800 (D) mg/L.

ФИГУРА 2 Влияние эргостерола на неоваскуляризацию у C57BL/6мышей – носителей LLC клеток внедренных в полости. Полости, наполненные клетками карциномы легкого Льюиса (LLC) были подкожно внедрены в спинной воздушный мешочек C57BL/6 мышей в нулевой день. Среда в модификации Дульбеко, (нормальные, A), LLC упакованные клетками полости (контрольные, B) или 5 (C), 10 (D) или 20 (E) мг эргостерола/кг были внутрибрюшинно введены при d 1 - 5. Мыши были убиты при d 6, и волосы на коже контактирующие с полостью были тщательно сбриты. Формирование новых кровеносных сосудов в подкожной области было сфотографировано.

ТАБЛИЦА 1

Влияние различных липидных фракций экстракта хлороформа/метанола (1:1, v/v), фракций растворимых и - нерастворимых ацетоном и фракции n-гексан-растворимых и - нерастворимых на объем опухоли при 20 d и весе опухоли при 21 d у мышей – носителей Саркомы 180

1 Различные липидные фракции вводимые орально мышам – носителям Саркомы 180 (800 мг/кг) для 20 d.

2 При 20 d.

3 При 21 d. Процент подавления (%) был измерено как объем опухоли или вес опухоли различных мышей, которым вводились липидные фракции разделенная на объем или вес опухоли мышей из контрольной группы. Каждая величина представляет среднюю величину ± sem, n = 10. Те, которые не разделяют символ, достоверно различны, P <0.05.

Антиопухолевая активность и побочные эффекты эргостерола у мышей носителей Саркомы 180 и LLC. Оральное введение эргостерола при 20 d уменьшало объем опухоли (рис. 1). Процент подавления роста опухоли при оральном вводе эргостерола в дозах 100, 200, 400 и 800 мг/кг X 20 d составили 0.0 ± 30.6, 62.3 ± 8.8, 70.9 ± 10.8 и 85.5 ± 4.7 %, соответственно. Внутрибрюшинная инъекция эргостерола также подавляла рост опухоли в дозах 10, 50, 100 и 200 мг/кг для 20 d, при проценте подавления 20.6 ± 20.5, 57.1 ± 6.5, 65.8 ± 4.7 и 84.7 ± 4.2 %, соответственно.

Вес опухоли были значительно уменьшен и при внутрибрюшинном, и при оральном введении эргостерола Таблица 2. Ни оральное, ни внутрибрюшинное введение эргостерола не вызвало побочных эффектов, типа снижения массы тела или эпидидимальной жировой ткани, угнетение костного мозга (сокращение числа лейкоцитов) или иммунотоксикацию (снижение тимуса и веса селезенки) (данные, не представлены). Кроме того, эргостерол снизил вес опухоли и рост опухоли уже при дозе 800 мг/кг при d 20-23 у мышей носителей LLC (данные, не представлены).

Влияние эргостерола на действие иммунной системы и метастазы в легких в мышах носителях LLC, и цитотоксичности против Саркомы 180 и клеток LLC. Эргостерол не имел никакого влияния на число селезёночных лимфоцитов или CD4 +, CD8 + или NK1.1 + T клетки (данные, не представлены). Число колоний в легких мышей носителей LLC (контрольная группа) составили 4.80 ± 1.24 х 10⁶. Оральное введение эргостерола не имело никакого влияния на метастазы в легких в дозах 50, 200 и 800 мг/кг при 23 d, с количеством колоний опухоли (х10⁶) 3.80 ± 1.62, 4.00 ± 0.58 и 5.33 ± 0.67, соответственно. Эргостерол не проявил никакой цитотоксичности против клеток саркомы 180 и LLC (данные, не представлены).

Влияние эргостерола на неоваскуляризацию вызванную LLC. При 5 d после того, как имплантации клеток LLC, заключенных в мембранную полость, Неоваскуляризация стала очевидной в области, контактирующей с полостью содержащей клетки LLC. Ведение эргостерола внутрибрюшинно предотвратило неоваскуляризацию (на 20 мг/кг), вызванную клетками LLC (рис. 2).

Влияние эргостерола на неоваскуляризацию, вызванную Matrigel. Сгустки, которые сформировались после подкожного внедрения только Matrigel, быстро стали отличаться от окружающих тканей и проявляли никакую или только локальную реакцию или ангиогенную реакцию (рис. 3A). Однако, Matrigel, с добавлением 1 мг aFGF и 64 000 U гепарина/L выработал сгустки, которые проявили ангиогенную реакцию (рис. 3B). Смесь Matrigel/aFGF/гепарин значительно увеличила вес сгустка и содержания гемоглобина в сгустках при d6 после имплантации, по сравнению с мышами, которым вводился только Matrigel Таблица 3. Эргостерол (400 и 800 mg/L) ингибировал увеличение веса и концентрацию гемоглобина сгустков (рис. 3, Таблица 3).

ТАБЛИЦА 2

Влияние внутрибрюшинного (IP) введения и орального введения эргостерола на вес опухоли при 21 d у мышей^1,2 носителей Саркомы 180

¹ Эргостерол вводился внутрибрюшинно или орально при 20 d в мышам – носителям Саркомы 180 .

² Каждое значение представляет среднее ± sem, n = 10. Те, которые не разделяют символ, достоверно различны, P <0.05.

ТАБЛИЦА 3

Влияние эргостерола на вес и содержании гемоглобина в сгустках при 5 d после внедрения в мышей Matrigel восполненного кислотным фактором роста фибробласта (aFGF) и гепарином^1,2

¹ Каждой С57BL/6 мыши был подкожно введено 0.5 мл Matrigel дополненного 1 мг aFGF/L и 64 X 10³ U гепарин/L в отсутствии или присутствии эргостерол (400 или 800 mg/L).

² Каждое значение ценности представляет среднее ± sem, n = 5. Те, которые не разделяют символ, достоверно различны, P <0.05.

ОБСУЖДЕНИЕ

A. blazei использовался-300 000-500 000 человек для предотвращения рака и/или как вспомогательное средство при химиотерапии рака после удаления злокачественной опухоли. Было множество сообщений, что различные базидиомицеты проявляют антиопухолевую активность у мышей-носителей Саркомы 180. Chihara (7) сообщил об исследовании, в котором оценка антиопухолевой активности была выполнены при помощи внутрибрюшинной инъекцией водных экстрактов различных базидиомицетов. Mizuno и др. (1) также оценил антиопухолевую активность у мышей-носителей Саркомы 180 при помощи введения вводного экстракта A. blazei. Недавно, Ito и др. (8) сообщил, что внутрибрюшинный или оральный ввод комплекса полисахарид/белок A. blazei проявляет антиопухолевую активность у мышей носителей опухоли. Однако, антиопухолевая активность липидных фракций еще не была известна. В существующем исследовании, мы обнаружили что липидная фракция, так же как фракция β-глюкан, ингибирует рост опухоли. Мы изолировали антиопухолевое вещество эргостерол от липидных фракций путем повторной хроматографии колонки геля кварца. Кроме того, мы нашли несколько компонентов, дополняющих к эргостерол. Ведутся исследования неизвестных изолированных составов, чтобы определить их структуру и исследовать их влияние на рост опухоли. Внутрибрюшинный и оральный ввод эргостерола подавлял рост опухоли, не вызывая ни одного из побочных эффектов, которые обычно вызываются лекарствами для химиотерапии рака. Эргостерол не имел никакого цитостатического действия на клетки саркомы 180 клеток in vitro (данные, не представлены). Эргостерол - предшественник эргокальциферола. Сообщалось, что cholecal-ciferol подавляет ангиогенез (9-11). Эргостерол метаболит эргокальциферола может также подавить ангиогенез. Поэтому, чтобы разъяснить механизм антиопухолевой активности эргостерола, мы исследовали влияние эргостерола на неоваскуляризацию, вызванную опухолью. Неоваскуляризация, вызванная полостями, заполненными клетками LLC была подавлена внутрибрюшинным введением эргостерола в дозах 5, 10 и 20 мг/кг для 5 последовательных d. Это говорит о том, что или эргостерол или его метаболиты (например, эргокальциферол) могут быть вовлечены в подавление неоваскуляризации, вызванной опухолью. Поэтому, мы далее исследовали подавляющее влияние эргостерола на неоваскуляризацию, вызванную Matrigel, с использованием модели in vivo. Женским C57BL/6 мышам были подкожно введены Matrigel, содержащий aFGF и гепарин с или без эргостерола. Эргостерол подавил неоваскуляризацию, вызванную Matrigel при концентрациях 400 и 800 mg/L. Это открытие указывает, что эргостерол может непосредственно подавить неоваскуляризацию, вызванную Matrigel и что антиопухолевая активность эргостерола может быть следствием подавления ангиогенеза, вызванного твердыми опухолями. Это - первое сообщение о том, что эргостерол является антиангиогенезным веществом.